喘可治在ACO治疗中的作用及对TET1基因甲基化的影响

摘要

第一部分 哮喘-慢阻肺重叠患者的临床特征分析　　目的：通过研究ACO患者的临床特征包括合并症和并发症情况，从而提供鉴别哮喘、慢阻肺、ACO患者的临床依据，进一步指导治疗。　　方法：选取2016年6月至2018年6月就诊于海军军医大学附属长海医院呼吸与危重症科患者，其中哮喘组74人，慢阻肺组66人，ACO组60人。收集三组患者一般资料，以及ACT评分、CAT评分、综合医院焦虑抑郁量表（HAD），外周血EOS%、血清总IgE、肺功能指标、FeNO值、肺部CT。记录患者入组前一年内急性发作次数，记录包括临床症状、发作时的各项实验室检查。　　结果：慢阻肺、ACO、支气管哮喘三组患者中，支气管哮喘组的年龄偏小，慢阻肺组年龄最大，ACO组年龄介于支气管哮喘组和慢阻肺组之间，差异具有统计学意义（P＜0.05）。吸烟指数中慢阻肺组、ACO组及支气管哮喘组具有明显统计学差异（P＜0.001）。对比外周血EOS%、血清IgE、FeNO值，ACO组和慢阻肺组患者均小于哮喘组患者，其中ACO组患者FeNO值高于慢阻肺组患者（P＜0.05）。对比肺功能指标，支气管哮喘组在FEV1%pred、FVC%pred、FEV1/FVC%等肺通气功能指标上明显高于慢阻肺组与ACO 组（P＜0.05）；慢阻肺组FEV1%pred、FVC%pred、FEV1/FVC% 值与ACO 组差异无统计学意义（P＞0.05）。　　肺部CT提示肺气肿征中慢阻肺组阳性率81.8%，ACO组阳性率60%，而支气管哮喘组肺部CT检查均未发现肺气肿征。根据肺部CT结果将ACO组分为肺气肿征（+）组及肺气肿征（-）组进行对比，发现肺气肿征（+）组平均年龄（63.52±10.4）岁，肺气肿征（-）组平均年龄（58.67±13.38）岁，差异具有统计学意义（P＜0.05），肺气肿征（+）组的体重指数及吸烟指数较肺气肿征（-）组差异具有统计学意义（P＜0.05），两组肺功能指标中除了FVC%pred指标无统计学差异性（P＞0.05）， FEV1%pred、FEV1/FVC%均具有统计学差异性（P＜0.05）。　　三组患者在焦虑、抑郁发病率无明显差异（P＞0.05）。其中，ACO组的中重度焦虑患者比例占55.6%，中重度抑郁患者比例占65.0%。　　结论：ACO合并肺气肿征的患者肺通气功能受损及气道阻塞程度更加严重，急性发作的临床特征与并发肺气肿征相关，ACO肺气肿征（+）患者急性发作常常以慢阻肺急性发作为特征，ACO肺气肿征（-）患者常常以支气管哮喘急性发作为特征。其次，ACO、支气管哮喘、慢阻肺患者焦虑和抑郁的发病率无明显统计学差异，但是严重的心理疾病ACO发病率比哮喘及慢阻肺患者高。　　第二部分 喘可治治疗哮喘-慢阻肺重叠患者的疗效分析　　目的：本研究对ACO患者使用喘可治注射液干预治疗，并进行分析，比较用药后的患者和常规治疗的患者病情及肺功能改善程度，了解喘可治的治疗效果。　　方法：选取2016年6月~2018年6月就诊于海军军医大学附属长海医院呼吸与危重症科的哮喘专病门诊的ACO患者68人。收集ACO组患者一般情况和临床资料。将ACO组按患者随机入组分为对照组和治疗组，对照组治疗为ICS+ LABA+LAMA，治疗组加用喘可治注射液。治疗6个月为一个疗程，治疗后复查肺功能、EOS%、FeNO值等。二组均随访1年，观察患者急性发作的频次。各组在性别、年龄、病情严重程度、吸烟史等无显著性差异（P＞0.05）。　　结果：治疗后ACO治疗组ACT评分较治疗前升高，ACO治疗组评分高于ACO对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；相比CAT评分，ACO治疗组的分值在治疗后降低，ACO治疗组的分值低于ACO对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.05），治疗后，ACO治疗组除了FVC%pred外，FEV1%pred、FEV1/FVC%值较治疗前明显改善，且ACO治疗组以上指标高于ACO对照组，差异具有统计学意义（P均＜0.05）， ACO治疗组与ACO对照组相比，外周血嗜酸性粒细胞百分比值、IgE、 FeNO值的差异无统计学意义（P＞0.05）。　　治疗后，ACO对照组和治疗组患者比较，焦虑和抑郁评分改善无明显差异（P＞0.05）。通过比较二组1年的急性加重次数发现，ACO治疗组显著低于ACO对照组（P＜0.05）。　　结论：本研究对ACO患者使用喘可治注射液进行干预治疗，研究发现喘可治可改善患者症状，提高肺功能，减少急性发作次数。　　第三部分 喘可治对哮喘-慢阻肺重叠患者TET1基因甲基化及表达水平的影响　　目的：研究ACO患者TET1的甲基化和基因表达情况，探索喘可治治疗对ACO患者TET1的DNA甲基化和基因表达能否产生影响。　　方法：选取2016年6月至2018年6月就诊于第二军医大学附属长海医院呼吸与危重症科的哮喘专病门诊的ACO患者20人、正常人20人。将ACO组随机分为对照组（10人）和喘可治治疗组（10人）。首先对三组人群进行了TET1启动子cg23602092甲基化水平进行了检测，用qPCR分析评价正常人、ACO对照组、ACO喘可治治疗组中TET1的表达谱，用ELISA的方法检测5hmc的水平评估三组人群外周血中DNA甲基化水平的程度。　　结果：ACO对照组和正常人比较，两者TET1甲基化程度不同（P＜0.05），ACO对照组比正常人TET1启动子cg23602092甲基化程度更低。喘可治治疗后的ACO治疗组患者与ACO对照组之间TET1启动子cg23602092甲基化水平的出现差异（P＜0.05）。　　ACO对照组较正常人TET1的表达水平升高（P＜0.05）。而ACO喘可治治疗组较ACO对照组TET1表达水平明显降低（P＜0.05）。ACO对照组外周血5hmc水平比正常人高（P＜0.05），ACO喘可治治疗组外周血5hmc水平较对照组显著降低（p＜0.001）。　　结论：本课题研究发现ACO在TET1启动子区域的特定CPG（cg23602092）位点上DNA甲基化水平降低，且TET1的表达水平在ACO患者样本中发生了改变，较正常人有所上调，而喘可治治疗后，ACO患者的TET1表达发生了下调。

目录

声明

缩略词表

第一部分 哮喘-慢阻肺重叠患者的临床特征分析

前言

一、材料与方法

（一）研究对象

（二）研究方法

（三）实验室检查

（四）统计学分析

二、实验结果

（一）慢阻肺组、ACO组、支气管哮喘组患者基本资料的比较

（二）慢阻肺组、ACO组、支气管哮喘组患者合并肺气肿征的情况

（三）慢阻肺组、ACO组、支气管哮喘组患者合并焦虑与抑郁情况

三、讨论

第二部分 喘可治治疗哮喘-慢阻肺重叠患者的疗效分析

前言

一、材料与方法

（一）研究对象

（二）研究方法

（三）实验室检查

（四）统计学分析

二、实验结果

（一）ACO对照组、ACO治疗组患者入组一般资料比较

（二）ACO对照组、ACO治疗组患者ACT、CAT评分比较

（三）ACO对照组、ACO治疗组患者肺功能指标比较

（四）ACO对照组、ACO治疗组患者炎症指标比较

（五）ACO对照组和ACO治疗组焦虑与抑郁情况比较

（六）随访ACO对照组和ACO治疗组患者急性发作情况比较

三、讨 论

第三部分 喘可治对哮喘-慢阻肺重叠患者TET1基因甲基化及表达水平的影响

前言

一、材料与方法

（一）外周血DNA抽提

（二）DNA甲基化检测

（三）RNA 抽提

（四）反转录合成第一链cDNA

（五）实时定量PCR反应（real-time PCR）

（六）聚合酶链式反应（PCR）

（七）琼脂糖凝胶电泳

（八）酶联免疫实验（ELISA）

二、实验结果

（一） ACO 对照组、ACO 治疗组和正常人 TET1 启动子cg23602092位点甲基化水平不同

（二）ACO对照组、ACO治疗组和正常人TET1表达水平不同

（三）ACO对照组、ACO治疗组和正常人TET1整体5hmc水平不同

三、讨 论

小结

参考文献

文献综述:支气管哮喘的表观遗传学研究进展

创新点与学术意义

在读期间发表的论文专著情况

致谢