声明
摘要
符号说明
前言
1．NSCLC EGFR-TKIs的国内外研究现状
1．1EGFR蛋白结构特性及其下游信号通路
1．2EGFR-TKIs的研究进展及获得性耐药
2．IL-6及IL-6／Jak1／Stat3信号通路对EGFR-TKIs获得性耐药的影响
2．1IL-6及IL-6／Jak1／Stat3信号通路相关蛋白
2．2IL-6及IL-6／Jak1／Stat3信号通路促进细胞的增殖、迁移及耐药
3．microRAN-206(miR-206)对EGFR-TKIs获得性耐药的影响
3．1miRNA在NSCLC靶向治疗的作用
3．2miRNA与IL-6／Jak／Stat3信号通路的关系
3．3 miR-206在NSCLC中的作用
第一部分 基于生物信息学的肺癌数据库分析
1．材料
2．方法
2．1差异miRNA的筛选
2．2miRNA靶基因预测
2．3KEGG和Reactome通路膏集分析
3．结果
3．1miR-206在GSE36681数据集肿瘤样本中显著下调
3．2miR-206靶基因富集分析
4．小结
第二部分临床样本中miR-206和IL-6的表达水平与相关性分析
1．2临床样本来源与保存
2．方法
2．1组织总RNA的提取
2．2反转录
2．3qPCR
2．4ELISA测定血液样本中IL-6浓度
2．5统计学方法
3．结果
3．1吉非替尼耐药EGFR突变的NSCLC患者及对照组中miR-206及IL-6的表达
3．2 14例EGFR突变的吉非替尼耐药的NSCLC组织中IL-6的表达
4．小结
第三部分miR-206／IL-6／Jak1／Stat3轴调控非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药
1．材料
1．1主要试剂
1．2主要仪器和厂家
1．3细胞系
2．方法
2．1细胞复苏、传代与培养
2．2人重组IL-6刺激细胞
2．3细胞转染
2．4细胞活力检测(CCK-8法)
2．5细胞凋亡实验(Annexin V-FITC／PI流式细胞分析法)
2．6克隆形成实验
2．7RNA的提取和RT-qPCR
2．8蛋白提取和Western Blot
2．9免疫共沉淀(Co-IP)
2．10荧光素酶报告基因实验
2．11RNA-ChIP(RNA-chromatin immunoprecipitation)
2．12裸鼠皮下瘤移檀模型的建立
2．13数据统计学分析
3．结果
3．2miR-206恢复了L-6处理的EGFR突变细胞株对吉非替尼的敏感性
3．3miR-206抑制EGFR突变细胞株IL-6／Jak1／Stat3信号通路的激活
3．4miR-206靶向调节IL-6的表达水平
3．5 IL-6通过抑制pri-miR-206嵌入Drosha／DGCR8复合物诱导miR-206表达下调
3．6体内实验检测miR-206抑制PC-9细胞成瘤性并提高吉非替尼敏感性
4．小结
讨论
结论及展望
参考文献
附图
附表
致谢
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英文论文1
英文论文2
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