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摘要
符号说明
1．1生物冶金简介
1．2硫化矿生物冶金的机理
1．3嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的简介
1．4A．ferrooxidans的亚铁氧化代谢系统
1．5转录组分析
1．6亚铁氧化酶
1．7本文的研究目的和研究内容
第二章 rus操纵子部分基因过表达与功能分析
2．1方法和材料
2．1．1菌株和质粒
2．1．2培养基和培养条件
2．1．3培养方法
2．1．4试剂以及仪器
2．1．5本章所使用引物
2．1．6常用的PCR扩增反应体系
2．1．7同源重组连接体系
2．1．8常规分子生物学实验操作
2．1．9A．ferrooxidans菌体生长的测定
2．2实验结果与讨论
2．2．1pJRD215质粒去除链霉素抗性基因重组质粒的构建
2．2．2嗜酸性氧化亚铁硫杆菌cyc2、cyc1、cup、coxABCD、rus基因高效表达菌株的构建
2．2．3A．ferrooxidans(pJRD215-S)与cyc2、cyc1、cup、coxABCD、rus基因过表达菌株在以亚铁为能源时的生长差异比较
2．2．4A．ferrooxidans(pJRD215-S)与cyc2、cyc1、cup、coxABCD、rus基因过表达菌株在以亚铁为能源时的亚铁氧化能力测定
2．2．5A．ferrooxidans(pJRD215-S)与cyc2、cyc1，cup、coxABCD、rus基因过表达菌株在以硫粉为能源时的生长差异比较
2．2．6A．ferrooxidans(pJRD215-S)与cyc2、cyc1、cup、coxABCD、rus基因过表达菌株在亚铁能源下的RT-PCR检测
2．3本章小结
第三章嗜酸性氧化亚铁硫杆菌亚铁氧化相关基因的转录组学分析
3．1方法与材料
3．1．1菌株
3．1．2培养基的制备
3．1．3仪器与试剂
3．1．4转录组测序样本制备
3．1．5转录组测序
3．1．6信息分析流程
3．1．7新转录本预测
3．1．8基因表达量分析
3．1．9差异表达基因检测与分析方式
3．2转录组测序结果分析
3．2．1测序数据过滤统计后reads质量统计
3．2．2新转录本预测
3．2．3基因表达量分析
3．2．4差异表达基因
3．2．5DEG的显著性GO有向无环图分析
3．2．6显著差异表达基因Pathway分析
3．3本章小结
第四章嗜酸性氧化亚铁硫杆菌AFE_1428基因高效表达工程菌的构建及性质研究
4．1方法与材料
4．1．1菌株和质粒
4．1．2培养基的制备
4．1．3仪器与试剂
4．1．4本章所使用引物
4．1．5常用反应体系和常规分子生物学实验操作
4．1．6常规A．ferrooxidans实验操作
4．2实验结果与讨论
4．2．1嗜酸性氧化亚铁硫杆菌AFE_1428基因高效表达菌株的构建
4．2．2AFE_1428基因过表达菌株在以亚铁为能源时生长曲线的测定
4．2．3AFE_1428基因过表达菌株在以亚铁为能源时亚铁氧化曲线的测定
4．2．4AFE_1428基因过表达菌株在以硫粉为能源时的生长测定
4．2．5AFE_1428基因过表达菌株在亚铁能源下的RT-PCR检测
4．3本章小结
第五章cyc2与AFE_1428基因的异源表达、蛋白纯化和亚铁氧化酶活性检测
5．1方法和材料
5．1．1生物信息学软件
5．1．2菌株和质粒
5．1．3大肠杆菌的培养基和培养条件
5．1．4试剂和仪器
5．1．5本章实验所用引物
5．1．6常用PCR扩增反应体系
5．1．7常用酶切体系
5．1．8常用连接反应体系
5．1．9常规分子生物学实验操作
5．2实验结果与讨论
5．2．2 cyc2与AFE_1428基因异源表达重组质粒的构建
5．2．3 Cyc2和AFE_1428蛋白的表达和纯化
5．2．4亚铁氧化酶活性测定
5．3本章小结
总结与展望
参考文献
致谢
山东大学;
