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摘要
第1章文献综述
1．1芳樟醇的概述
1．2芳樟醇的生产方式和现状
1．2．1植物提取
1．2．2化学合成
1．3芳樟醇的生物合成途径
1．4芳樟醇的异源合成研究进展
1．4．1利用大肠杆菌异源合成芳樟醇
1．4．2利用酿酒酵母异源合成芳樟醇
1．5代谢改造酿酒酵母生产其它单萜类化合物的研究
1．5．1单萜合成酶的研究
1．5．2MVA途径的改造
1．5．3增加前体物质GPP的供应
1．5．4降低单萜对酿酒酵母的毒性
1．6本课题研究的内容和意义
第2章不同来源的芳樟醇合成酶筛选
2．1前言
2．2实验设备与材料
2．2．1仪器设备
2．2．2试剂和引物
2．2．3菌株和质粒
2．2．4主要溶液和培养基
2．3实验方法
2．3．1大肠杆菌感受态细胞的制备
2．3．2基因片段的克隆
2．3．3质粒的构建
2．3．4克隆质粒的验证与扩增
2．3．5酿酒酵母转化方法
2．3．6酿酒酵母的两相发酵
2．3．7芳樟醇产量的分析
2．3．8芳樟醇标准曲线的建立
2．4结果与讨论
2．4．1芳樟醇标准曲线的建立
2．4．2异源芳樟醇合成酶的克隆与表达
2．4．3不同来源的芳樟醇合成酶对芳樟醇产量的影响
2．4．4本章小结
第3章芳樟醇合成酶t670McLIS的定向进化
3．1前言
3．2实验材料与试剂
3．3实验方法
3．3．1质粒与菌株的构建
3．3．2角鲨烯与类胡萝卜素的提取与产量分析
3．3．3芳樟醇合成酶的定向进化
3．3．4实时荧光定量PCR
3．3．5培养基中葡萄糖浓度的测定
3．3．6分子对接
3．3．7角鲨烯标准曲线的建立
3．4结果与讨论
3．4．1角鲨烯标准曲线的建立
3．4．2过表达整个MVA途径以加强前体转化
3．4．3t67OMcLIS定向进化高通量筛选方法的建立
3．4．4t67OMcLIS突变体的筛选
3．4．5突变点机理研究
3．4．6本章小结
第4章t67OMcLISE343D／E352H和ERG20F96W／N127W的组合调控
4．1前言
4．2实验材料与试剂
4．3实验方法
4．3．1质粒与菌株构建
4．3．2实时荧光定量PCR
4．3．3蛋白质印迹分析
4．3．4乙醇的定量分析
4．3．5乙醇标准曲线的建立
4．4结果与讨论
4．4．1乙醇标准曲线的建立
4．4．2通过SKIK标签提高t67OMcLISE343D／E352H的表达
4．4．3SKIK~t67OMcLISE343D／E352H和ERG20F96W／N127W的融合表达
4．4．4下调内源的ERG20以增加芳樟醇的产量
4．4．5本章小结
第5章结论与展望
5．1结论
5．2展望
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
扬州大学;
