不同氮效率小麦TaGS同工酶基因表达特点

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摘要

1文献综述

1．1不同氮效率小麦品种对氮素吸收和利用的差异

1．2谷氨酰胺合成酶在氮素运转同化中的作用

1．3谷氨酰胺合成酶的研究进展

1．4启动子对谷氨酰胺合成酶基因的调控研究进展

1．5存在问题与本研究意义

2引言

3材料与方法

3．1试验材料与设备

3．1．312个TaGS同工酶启动子拟南芥GUS染色及RT-PCR

3．2试验方法

3．2．1TaGS同工酶酶活测定

3．2．2 TaGs同工酶蛋白亚基测定(western-blot)

3．2．3RNA的提取及TaGs同工酶RT-PcR测定

3．2．4三代测序

3．2．5构建克隆载体

3．2．6启动子序列分析及转录起始位点预测

3．2．7双元表达载体构建

3．2．8拟南芥培养转化与鉴定

3．2．9GUS染色鉴定不同TaGs同工酶启动子活性

3．2．10转TaGS同工酶启动子拟南芥阳性植株RNA的提取及RT-PCR测定

4结果与分析

4．1不同氮效率小麦品种TaGs同工酶酶活及蛋白表达分析

4．1．1不同氮效率小麦品种TaGs同工酶活性分析

4．1．2不同氮效率小麦品种TaGs同工酶蛋白亚基表达分析

4．2不同氮效率小麦品种TaGS同工酶mRNA水平分析

4．2．112个TaGS同工酶基因在染色体上位置及同源性分析

4．2．2RNA提取、cDNA质量验证及引物特异性鉴定

4．2．312个TaGs同工酶基因在A、B、D染色体上表达分析

4．3TaGS同工酶启动子克隆及序列分析

4．3．1TaGS同工酶启动子克隆

4．3．2TaGS同工酶启动子序列分析

4．4．1双元表达载体构建及鉴定

4．4．2农杆菌转化鉴定及转TaGS启动子拟南芥阳性植株鉴定

4．4．3转TaGS启动子拟南芥阳性植株GUS染色结果分析

4．5．1转基因拟南芥阳性植株RNA提取及cDNA质量验证

4．5．2转基因拟南芥阳性植株引物特异性鉴定及RT-PCR结果分析

5讨论

5．1不同氮效率小麦品种TaGs同工酶蛋白质与mRNA水平表达关系

5．2 TaGS同工酶启动子转录因子结合位点与基因表达的关系

6结论

参考文献

主要成果