复方芪参注射剂制备工艺与组方优化的研究

摘要

中药复方具有化学成分高度复杂性和治疗整体性这两大特性.为使复方中药的作用更加具有专一性,主要药效作用更加突出,有利于药效学研究并增加药品安全性、有效性和质量的可控性,我们在原复方芪参汤剂的基础上,通过药学、药效学和计算机等密切结合,改进制备工艺,提取药材中有效部位群,合理配伍,进行体内、外药理实验的验证,研制治疗慢性肝炎及抗肝纤维化的中药新药--复方芪参注射剂.现将主要内容概括如下:(1)有效部位的研究采用正交实验法,以有效部位的含量为指标,利用大孔树脂分离、纯化黄芪及丹参的有效部位,使有效部位的含量达到药用标准(有效部位的百分含量>50﹪). 采用血清刺激肝星状细胞株(HSC-T<,6>细胞),用结晶紫染色法检测其增殖活性,分别考察总皂苷和总酚酸对HSC-T<,6>细胞增殖的影响.结果表明,两个有效部位均能浓度依赖性地抑制血清促进的HSC-T<,6>细胞的增殖.(2)有效部位的配伍研究组成复方芪参注射剂的各有效部位的配伍与其药效有密切关系,因此选择与药效相关的药理指标,考察各有效部位的配伍关系.根据均匀设计法,将复方中的两个有效部位组成6个配伍组,采用体外血清激活HSC-T<,6>细胞模型,观察各配伍组对HSC-T<,6>细胞增殖的影响.结果表明,最佳配伍为:总皂苷8mg/L+总酚酸20mg/L.在组方中重要程度:总皂苷>总酚酸;总皂苷与总酚酸问的作用具有相加性.(3)新组方的药效学研究采用四氯化碳(CCl<,4>,ip)诱导小鼠急性肝损伤模型.结果表明,复方芪参注射剂三个剂量组和阳性药组均能显著降低CCl<,4>升高的小鼠肝指数和脾指数,但仅能略降低血清ALT水平,与模型组比较无显著性差异.病理组织学统计结果显示,CCl<,4>可诱导小鼠出现明显的肝细胞损伤、肝细胞再生及间质炎细胞浸润等病理组织学变化.复方芪参的不同剂量组及阳性药组均能略微减轻肝细胞损伤和间质炎细胞浸润以及促进肝细胞再生,但无统计学意义.这些研究结果表明,复方芪参对CCl<,4>致小鼠急性肝损伤动物模型的保护作用并不显著.

目录

文摘

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致谢

第一章综述

1.1黄芪简介

1.1.1黄芪的化学成分

1.1.2黄芪的药理作用

1.1.3黄芪的应用

1.1.4总皂苷分离及纯化工艺研究进展

1.2丹参简介

1.2.1丹参的化学成分

1.2.2丹参总酚酸的药理作用

1.2.3丹参总酚酸提取精制方法的研究进展

1.3肝星状细胞简介

1.4肝损伤的机制

1.4.1肝损伤的化学机制

1.4.2肝损伤的免疫学机制

1.5本实验的研究目的及意义

第二章黄芪总皂苷的提取分离和含量测定

2.1引言

2.2实验内容

2.2.1实验材料与仪器

2.2.2黄芪总皂苷的含量测定

2.2.3黄芪总皂苷粗提物的制备

2.2.4大孔树脂的预处理

2.2.5黄芪粗提物中总皂苷的含量测定

2.2.6大孔吸附树脂静态吸附量的测定

2.2.7黄芪总皂苷粗提物的分离、纯化

2.3结果与讨论

2.3.1标准曲线制备结果

2.3.2大孔吸附树脂对总皂苷的静态吸附量

2.3.3黄芪总皂苷粗提物的分离、纯化

第三章丹参总酚酸的提取分离和含量测定

3.1引言

3.2实验内容

3.2.1实验材料与仪器

3.2.2丹参总酚酸含量测定方法

3.2.3丹参总酚酸的提取工艺

3.2.4总酚酸在树脂柱上最大吸附量的确定

3.2.5丹参总酚酸的分离纯化工艺

3.3结果与讨论

3.3.1标准曲线的制备

3.3.2总酚酸在树脂柱上的最大吸附量

3.3.3丹参总酚酸的分离纯化工艺

第四章复方芪参对HSC-T6细胞增殖的影响

4.1引言

4.2实验内容

4.2.1实验材料与仪器

4.2.2实验方法

4.3结果与讨论

4.3.1肝星状细胞(HSC-T6)的培养与细胞增殖的测定

4.3.2总皂苷、总酚酸对血清刺激的HSC-T6细胞增殖的影响

4.3.3各有效部位不同组方对血清刺激HSC-T6细胞增殖的影响—权重配方法优化复方芪参的组方

第五章复方芪参注射剂对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

5.1引言

5.2实验内容

5.2.1实验材料与仪器

5.2.2实验方法

5.3结果与讨论

5.3.1复方芪参注射剂对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT的影响

5.3.2复方芪参注射剂对CCl4致急性肝损伤小鼠肝指数和脾指数的影响

5.3.3复方芪参对CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏病理组织学的影响

第六章结论与展望

6.1讨论

6.1.1有效部位的研究

6.1.2 HSC-T6细胞增殖测定方法的研究

6.1.3有效部位的配伍研究

6.1.4复方芪参对CCl4致小鼠急性肝损伤的治疗作用

6.2结论

6.2.1总苷的提取分离和含量测定

6.2.2总酚酸的提取分离和含量测定

6.2.3复方芪参对细胞增殖的影响

6.2.4复方芪参注射剂对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

6.3前景与展望

6.4本研究存在的问题和不足

附图

参考文献