多功能核酸分子探针的构建及其在生物检测与成像中的应用

目录

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前 言

第一章 绪论

1.1 引言

1.2 多功能荧光生物探针

1.2.1基于纯核酸分子构筑的生物探针

1.2.2基于核酸分子耦合纳米颗粒构筑的复合型生物探针

1.3 荧光生物传感器中的信号放大技术

1.3.1温度依赖型荧光信号放大技术

1.3.2酶依赖型荧光信号放大技术

1.4 多功能荧光生物探针的应用

1.4.1液体样品检测方面

1.4.2细胞成像方面

1.5 本论文拟开展的工作

第二章 基于脱氧尿苷/生物素修饰的核酸探针用于端粒酶及端粒酶RNA的免标记同时检测

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1试剂

2.2.2仪器

2.2.3端粒酶延伸反应和TR识别过程

2.2.4双向链置换扩增反应（SDA）过程

2.2.5细胞裂解液的制备

2.3 结果与讨论

2.3.1同时免标记检测的原理

2.3.2传感体系的可行性验证

2.3.3反应条件的优化

2.3.4体系的传感性能

2.3.5实际样品的测定

2.4 小结

第三章 基于细胞内串联滚环转录产生的Spinach RNA适体串用于固定细胞内端粒酶RNA的原位免标记成像

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1试剂

3.2.2仪器

3.2.3 TR的体外荧光检测

3.2.4细胞培养和荧光共聚焦成像

3.3 结果与讨论

3.3.1 Spinach RNA 适体串的原理

3.3.2 Spinach RNA 适体串的可行性验证

3.3.3反应条件的优化

3.3.4体系的传感性能

3.3.5 Spinach RNA 适体串的胞内可行性验证

3.4 小结

第四章 基于“拉链锁钥”载运模式的纳米花探针用于活细胞内端粒酶RNA的原位灵敏成像

4.1 引言

4.2 实验部分

4.2.1试剂

4.2.2仪器

4.2.3 DNA/RNANFs 的制备与表征

4.2.4 TR的体外检测

4. 2.5 凝胶电泳实验

4.2.6细胞培养和共聚焦成像

4. 2. 7细胞活力的测量

4.2.8细胞中TR的RT-PCR分析

4.3 结果与讨论

4.3.1纳米花探针的原理

4.3.2纳米花探针的表征

4.3.3纳米花探针的体外考察

4.3.4纳米花探针的细胞毒性和稳定性

4.3.5纳米花探针的胞内可行性验证

4.3.6纳米花探针的胞内TR检测

4.4 小结

参考文献

附 录

致 谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文