过表达SOCS1的DCs过继免疫烟雾致小鼠COPD模型BALF中Th17、Treg相关细胞因子的变化及意义

摘要

目的：通过回输过表达细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)的DCs到小鼠体内，并观察小鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型支气管肺泡灌洗液（BALF）中辅助性T细胞17 （ Th17 ）、调节性T细胞（ Treg ）相关细胞因子的变化，进一步探讨COPD的发病机制，为COPD寻找治疗靶点。　　方法：体外培养DCs并鉴定其表型、形态。构建SOCS1过表达慢病毒，转染培养第5天未成熟DCs（imDCs）获得SOCS1过表达DCs，使用蛋白印迹法（Western blot）检测SOCS1在DCs内的表达情况，并将转染的细胞以尾静脉注射法回输到小鼠体内；42只C57BL/6小鼠随机分成7个组，每组6只，分别是生理盐水（NS）、imDC 1×106、DC-SOCS11×106、DC-SOCS1 2×106烟熏造模第1天回输组、imDC 1×106、DC-SOCS1 1×106、DC-SOCS1 2×106烟熏造模第7天回输组。使用烟熏法建立COPD小鼠模型至实验第4周（28天）最后一次烟熏完后处死七组小鼠，并收集小鼠BALF。收集的BALF予以离心取上清液用于酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测Th17、Treg相关细胞因子的变化。　　结果：1、体外培养小鼠骨髓源性DCs，流式细胞术检测第7天脂多糖（LPS）诱导后DCs细胞有较高的CD80、CD83表达；应用扫描电镜观察第7天LPS诱导后DCs表面有明显众多的褶皱和树枝样突起。　　2、使用Western blot检测阳性转染组SOCS1的表达高于阴性转染组及空白组，差异有统计学意义（P<0.01）。　　3、第1天、第7天imDC 1×106、DC-SOCS1 1×106及DC-SOCS1 2×106回输组与第1天NS回输组相比，小鼠COPD模型BALF中白介素-17（IL-17）、IL-23含量降低，差异有统计学意义（ P<0.01 ）；第1天、第7天DC-SOCS1 1×106、DC-SOCS1 2×106回输组分别与imDC 1×106回输组比较BALF中IL-17、IL-23含量降低，差异有统计学意义（P<0.01）；DC-SOCS1 2×106回输组与DC-SOCS1 1×106回输组相比，BALF中IL-17、IL-23含量降低，差异有统计学意义（P<0.01）；DC-SOCS1 1×106第7天回输组小鼠BALF中IL-17的含量较第1天回输组增高，但差异无统计学意义（ P>0.05 ） ， IL-23含量增高差异有统计学意义（ P<0.01 ）；DC-SOCS1 2×106烟熏第7天回输组小鼠BALF中IL-17、IL-23的含量较第1天回输组增高，差异有统计学意义（P<0.01）。　　4、第1天、第7天imDC 1×106、DC-SOCS1 1×106及DC-SOCS1 2×106回输组与第1天NS回输组相比，BALF中IL-10、转换生长因子-β（TGF-β）含量增高，差异有统计学意义（P<0.01）；第1天、第7天DC-SOCS1 2×106回输组与DC-SOCS1 1×106回输组相比，BALF中IL-10、TGF-β含量增高，差异有统计学意义（P<0.01）；DC-SOCS1 1×106第7天回输组小鼠BALF中IL-10、TGF-β的含量较第1天回输组减少，差异有统计学意义（分别为P<0.05、P<0.01），DC-SOCS1 2×106烟熏第7天回输组小鼠BALF中IL-10、TGF-β的含量较第1天回输组减少，差异有统计学意义（P<0.01）。　　结论：1、imDCs回输小鼠体内可抑制COPD中Th17相关细胞因子分泌。　　2、SOCS1过表达的DCs回输小鼠体内后可抑制COPD中以Th17为主的免疫反应，效果优于单纯回输imDCs，且与浓度、时间有关，提示合适浓度、提前干预可能更早抑制COPD中以Th17为主的免疫反应，为COPD治疗提供新的靶点。

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