针刺“足三里”穴对端粒酶基因敲除小鼠海马区TRKB--ERK信号通路蛋白表达的影响

摘要

目的:观察不同基因型和不同月龄端粒酶基因敲除小鼠(telomerase-deficient，Terc-/-)行为学变化特点，并在此基础上研究针刺足三里穴对Terc-/-小鼠海马区TRKB-ERK信号通路蛋白表达的影响。　　方法:1.选用第3代Terc-/-小鼠，在小鼠3-4周龄时进行分笼、采血，经PCR法基因鉴定小鼠基因型。筛选出Terc-/-和野生型小鼠，随机选出2月龄、3月龄、5月龄、7月龄及9月龄小鼠各8只，共40只。对不同月龄Terc-/-和野生型小鼠进行行为学检测。检测完成后，对检测数据进行分析，观察Terc-/-和野生型小鼠随月龄增长其行为学变化特点。2.分别取24只7月龄Terc-/-和野生型小鼠，随机分为空白组、手针组和电针组，每组各8只，共48只。空白组在相同环境下饲养，仅模拟抓握;手针组取双侧足三里穴直刺约1.5mm，手针刺激30min，每5分钟行捻转手法一次，每天1次，连续干预7天;电针组取双侧足三里穴直刺约1.5mm，电针刺激30min，交替波，频率为2/50Hz，强度为2mA，每天1次，连续干预7天;干预结束后次日取脑组织，采用免疫组化法及免疫印迹法检验TRKB、ERK、P-ERK和NF-kB蛋白在海马区的表达。　　结果:1.Morris水迷宫:与野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠随月龄增长其潜伏期逐渐延长，逃避潜伏期的目标象限时间比逐渐减小，两组间在2、3和5月龄时无显著差异(p＞0.05)，但在7和9月龄时有显著差异(p＜0.05)。2.自主活动测试:与野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠在2、3和5月龄时的自主活动均无显著差异(P＞0.05)，但在7和9月龄时两组间出现显著差异(P＜0.05)。3.老化度评分:与野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠的评分值在2、3月龄时无显著差异(p＞0.05)，在5、7和9月龄时显著增高(P＜0.05)。4.免疫组化法结果:(1)干预后Terc-/-小鼠海马区TRKB蛋白阳性目标面密度:空白组(0.0233±0.007)、手针组(0.0312±0.005)、电针组(0.0363±0.007)，电针组与空白组比较，差异具有显著性(P＜0.05);Terc-/-小鼠海马区ERK蛋白阳性目标面密度:空白组(0.0148±0.074)、手针组(0.0270±0.010)、电针组(0.0201±0.008)，手针组与空白组比较，差异具有显著性(P＜0.05)。5.免疫印迹法结果:(1)干预后Terc-/-小鼠海马区TRKB蛋白相对体积:空白组(0.6940±0.249)、手针组(0.9525±0.139)、电针组(0.9801±0.129)，手针组和电针组与空白组比较，差异均具有显著性(P＜0.05)。Terc-/-小鼠海马区NF-kB蛋白相对体积:空白组(0.2891±0.070)、手针组(0.4066±0.126)、电针组(0.4856±0.066)，手针组和电针组与空白组比较，差异均具有显著性(P＜0.05)。　　结论:1.与同龄野生型小鼠相比，Terc-/-小鼠随月龄增长其行为活动出现显著增龄性变化，Terc-/-小鼠的衰老特点与年龄密切相关，年龄越大，衰老速度及程度越大，尤其在7月龄以后更为明显。　　2.针刺“足三里”穴可促进Terc-/-小鼠海马区TRKB、ERK和NF-KB蛋白的表达，但对野生型小鼠影响不显著。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 端粒酶基因敲除小鼠行为活动增龄性变化研究

1 材料

1．1 动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器与设备

2．1 实验小鼠基因鉴定

2．2 实验小鼠基因型鉴定结果

2．3 实验小鼠分组

2．4 行为学检测

3 统计方法分析

4 技术路线图

5 结果

5．1 Morris水迷宫

5．2 自主活动测试

5．3 老化度评分‘

第二部分 针刺对Terc-/-小鼠海马区TRKB-ERK信号通路蛋白表达影响

1 材料

1．1 实验动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器与设备

2 方法

2．1 动物干预

2．2 灌注取脑

2．3 免疫组化法检测

2．4 免疫印迹法检测

3 统计方法分析

4 技术路线图

5 结果

5．1 针刺对TRKB蛋白表达影响

5．2 针刺对ERK蛋白表达影响

5．3 针刺对P-ERK蛋白表达影响

5．4 针刺对NF-KB蛋白表达影响

分析与讨论

3．Terc-/-小鼠行为学特征的增龄性变化

3．1 小鼠Morris水迷宫实验结果

3．2 小鼠自主活动实验结果

3．3 小鼠老化度评分结果

5．针刺对Terc-/-小鼠TRKB-ERK信号通路蛋白表达影响

5．2 针刺对TRKB-ERK信号通路蛋白表达影响

6．不足与展望

结论

参考文献

文献综述

致谢

作者简历