蒙药古日古木单、复方对自身免疫性肝炎的保护作用

摘要

目的:研究蒙药古日古木、古日古木-13对刀豆蛋白A（concanavalin A，Con A）诱导的小鼠急性自身免疫性肝炎的保护作用，并探讨其中干扰素-γ（interferon gamma， IFN-γ）/细胞内信号传导与转录激活子1(Signal Transducer And Activator Of Transcription1，STAT1)/血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1， VCAM-1）通路的作用机制。　　方法:90只雌性BALB/c小鼠，随机分为9组，分别为空白对照组、模型组、阳性对照组、古日古木低、中、高剂量组、古日古木-13低、中、高剂量组，每组各10只。古日古木各剂量组分别灌胃给古日古木单方400mg/kg、800mg/kg、1600mg/kg；古日古木-13各剂量组分别灌胃给予400mg/kg、800mg/kg、1600mg/kg古日古木-13灌胃；阳性组灌胃给予0.02mg/kg地塞米松；空白组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃。连续灌胃7天。末次给药1h后，模型和各给药组尾静脉注射Con A20mg/kg致免疫性肝损伤。16h后，各组小鼠麻醉后取血，取肝、脾。应用ELISA法测定血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α，TNF-α)和干扰素-γ（interferon gamma， IFN-γ）浓度；取肝组织做HE染色；肝组织细胞进行Annexin V/PI双染法流式细胞术和TUNEL法检测凋亡；取肝组织Western blot法检测STAT1、p-STAT1、VCAM-1表达情况。　　结果:1.生化检测指标结果：模型组小鼠的血清ALT、ALP、TNF-α、IFN-γ水平明显高于空白对照组（P<0.05）。古日古木高剂量组、古日古木-13中剂量组和古日古木-13高剂量组均有降低ALT的作用。古日古木高剂量组、古日古木-13所有剂量组均有降低ALP的作用。古日古木-13中、高剂量有降低TNF-α的作用。古日古木中、高剂量组、古日古木-13所有剂量组均有降低IFN-γ的作用。2.病理检测结果：空白对照组小鼠肝小叶结构清晰，未见明显炎症。汇管区内未见明显炎症或纤维化。模型组小鼠肝小叶结构破坏，多腺泡坏死或多小叶坏死，周围剩留肝细胞常肿胀，部分呈气球样变。汇管区内未见明显炎症或纤维化。病变符合重度免疫性肝损伤。各给药组病变性质同模型组，但仅古日古木低剂量组见多小叶坏死，古日古木中剂量组和高剂量组以多腺泡坏死为主。古日古木-13低剂量和中剂量组以融合坏死为主，偶见桥接坏死。古日古木-13高剂量组和阳性组以点灶坏死为主，坏死病变范围最小，坏死严重程度最轻。总体来说，随剂量增加病变范围逐渐缩小，坏死程度逐渐减轻。3.TUNEL法检测肝细胞凋亡结果：染色结果可见，空白对照组肝细胞排列整齐，胞质淡染，细胞核较大。模型组肝细胞结构破坏，界限模糊，细胞核绝大部分发生皱缩并出现棕红色着染，其余未染色细胞变小，胞膜完整但出现发泡现象。各给药组的细胞核均出现不同程度的皱缩和着染，各给药组的肝细胞均出现不同程度的细胞核皱缩、着染。其中单方各剂量组着染程度较重，复方各剂量组着染程度较轻，尤其是复方中剂量组和高剂量组。4.流式细胞术检测肝细胞凋亡结果：相比空白对照组，模型组肝细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。各给药组均能够明显抑制Con A引起的肝细胞凋亡。5.Western blot检测蛋白表达结果：与空白对照组相比，模型组小鼠肝组织内STAT1蛋白、p-STAT1蛋白和VCAM-1蛋白表达量明显升高。除古日古木中剂量组和古日古木-13中剂量组外，其它给药组STAT1蛋白表达量均显著低于模型组（P<0.05）。除古日古木高剂量组外，其余给药组的 p-STAT1蛋白表达均较模型组显著降低（P<0.05）。所有给药组的VCAM-1蛋白表达量均显著低于模型组（P<0.05）。　　结论:古日古木、古日古木-13对Con A诱导的自身免疫性肝炎均有保护作用，这一作用可能是通过抑制IFN-γ生成，减少JAK/STAT1信号通路作用，下调VCAM-1表达及减轻肝细胞凋亡实现的。

目录

声明

前言

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

1.2 药品的制备

1.3 实验动物

1.4 方法

2 结果

2.2 古日古木、古日古木-13对肝脏外观形态的影响

2.3 古日古木、古日古木-13对肝、脾指数的影响

2.4 古日古木、古日古木-13对肝脏转化酶及炎性细胞因子的影响

2.5 古日古木、古日古木-13对肝脏病理的影响：

2.6 古日古木、古日古木-13对肝细胞凋亡的影响

2.7Western Blot检测

3 讨论

3.1 AIH模型的建立

3.2 古日古木、古日古木-13对自身免性肝损伤小鼠血清转氨酶的影响

3.2 古日古木、古日古木-13对自身免性肝损伤小鼠血清炎性细胞因子的影响

3.3 古日古木、古日古木-13对自身免性肝损伤小鼠肝组织病理的影响

3.4古日古木、古日古木-13对自身免性肝损伤小鼠肝细胞凋亡的影响

3.5 古日古木、古日古木-13对自身免性肝损伤小鼠肝组织STAT1、p-STAT1、VCAM-1表达的影响

4 结论

参考文献

文 献 综 述:自身免疫性肝炎的发生机制及JAK/STAT信号通路的作用

攻读学位期间发表论文情况

个 人 简 历

致谢