针灸对顺铂化疗小鼠肾组织中过氧化氢酶(CAT)和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)含量影响的研究

摘要

目的：　　通过观察针刺和艾灸对顺铂(Cis-Dichlorodiamineplatinum(II)，DDP)肾损伤模型小鼠肾组织中过氧化氢酶（ Catalase， CAT）及半胱氨酸蛋白酶3(Cysteine proteinase3，Caspase-3)表达水平，血清中肌酐(Creatinine，Cr)、尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)含量以及小鼠肾组织病理等变化的影响，探讨并阐释针灸改善顺铂化疗后小鼠肾损伤的作用机制。　　方法：　　选用雄性 KM小鼠50只，体重20±2g，自由喂养5d。按体重剔除两级后剩余40只，随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组，进行染色编号。按每只小鼠体质量于腹腔注射顺铂0.01 ml/g，建立顺铂化疗肾损伤模型。造模成功后，每天固定人员，定时选取小鼠，每次每组1只，各组依次同步治疗。针刺组、艾灸组选取“大椎”、“肝俞”、“肾俞”、“足三里”分别给以针刺、艾灸治疗，每日1次，连续5d；空白组和模型组每日仅陪同固定，不予治疗，连续5d。治疗完成当日禁水、禁食，次日取材。以摘眼球法取血，将血液进行常规分离后取血清，采用细胞生化分析仪，分析小鼠血清中 Cr、BUN的浓度，结果分别以μmol/L、mmol/L表示；小鼠脱颈处死后快速取出双肾，左肾放入配备好的甲醛溶液固定，以备做组织病理形态学研究；右肾放进冻存管，存于-80℃超低温冰箱，进行酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组小鼠肾组织中CAT、Caspase-3含量。所得数据采用SPSS19.0 for Windows进行统计分析。　　结果：　　1.治疗5d后，与空白组相比，模型组血清中Cr含量显著上升（P=0.00＜0.05）；与模型组相比，针刺组和艾灸组中 Cr含量明显降低（P=0.01＜0.05，P=0.01＜0.05），针刺组与艾灸组相比无统计学意义（P=0.99>0.05）。治疗5d后，与空白组相比，模型组小鼠血清中 BUN含量显著上升（P=0.00＜0.05）；与模型组相比，针刺组和艾灸组的含量降低（P=0.00＜0.05，P=0.00＜0.05），针刺组与艾灸组相比无统计学意义（P=0.75>0.05）　　2.病理切片结果：空白组肾小管上皮细胞排列有序，形态正常；模型组切片中细胞排列紊乱无序，细胞肿胀、空泡变性，肾小球数量变少且部分萎缩严重，视野中有较多蛋白管型出现。与模型组相比，针刺组、艾灸组见肾脏空泡变性显著减少，细胞排列较整齐，肾小球萎缩减轻，少有蛋白管型出现。　　3.治疗5d后，与空白组相比，模型组小鼠肾组织中 CAT含量显著降低（P=0.00＜0.05），与模型组相比，针刺组和艾灸组的含量明显升高（ P=0.00＜0.05；P=0.00＜0.05），艾灸组又高于针刺组（P=0.00＜0.05）。　　4.治疗5d后，与空白组相比，模型组小鼠肾组织中 Capase-3含量显著增高（P=0.00＜0.05），与模型组相比，针刺组和艾灸组的含量明显降低（P=0.00＜0.05；P=0.00＜0.05），艾灸组又低于针刺组（P=0.01＜0.05）。　　结论：　　1.针灸治疗可以拮抗DDP化疗所致的小鼠肾损伤，改善小鼠肾功能。　　2.针灸可以显著改善顺铂诱导的肾组织病理损伤，起到修复肾组织的作用。　　3.从分子生物学角度探讨：针灸可能通过上调DDP小鼠肾组织中抗氧化因子C AT的表达含量，增强机体清除脂质过氧化物的能力，防治顺铂造成的肾脏组织过氧化损伤。　　4.从分子生物学角度探讨：针灸可能通过抑制顺铂化疗后小鼠肾组织中相关凋亡因子Caspase-3的表达，对抗顺铂介导的细胞凋亡，修复因细胞凋亡引起的肾脏损伤，起到一定的抗顺铂化疗肾毒性的作用。

目录

声明

前言

材料与方法

1实验材料

2实验方法

3统计学分析

结果

1小鼠一般情况观察

2针灸对顺铂化疗小鼠肾功能的影响

3针灸对顺铂化疗小鼠肾脏组织形态学的影响

4针灸对顺铂化疗小鼠肾组织中相关因子含量的影响

理论探讨

1传统中医对化疗肾损伤的认识

2现代医学的认识

3 实验结果分析

4存在的问题及剖析

结论

参考文献

致谢

附录1 综述:中西医抗顺铂肾毒性的研究进展

附录2在校期间学术成绩