大黄素致小鼠泻剂结肠形成过程中Cajal间质细胞及SCF/c-kit的动态变化

摘要

目的:拟用单体大黄素建立小鼠泻剂结肠模型;观察泻剂结肠形成过程中结肠传输功能、结肠平滑肌电生理活动的变化、小鼠结肠大体及组织形态结构、Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal，ICC)数目、干细胞因子(Stem Cell Factor，SCF)及c-Kit蛋白的动态变化。　　方法:选取健康、雄性昆明（KM）小鼠72只，随机数字表法分为空白对照组(control group，C组)和持续用药组(persistant application group，P组)，每组36只。以含单体大黄素的饲料喂养小鼠，制备泻剂结肠小鼠模型。不同时相点分别采用生物机能实验系统检测小鼠结肠平滑肌电活动动态变化;活性炭悬液推进法测定肠道传输功能;肉眼观察小鼠结肠大体形态变化;HE染色观察小鼠结肠组织形态改变;冰冻切片免疫荧光标记观察ICC数量动态变化;ELISA测定小鼠血清SCF动态变化;Western blot法检测结肠组织中c-Kit蛋白含量的动态变化。　　结果:1、成功建立模型:利用单体大黄素成功建立小鼠泻剂结肠模型，用时12W。用药2W后P组小鼠毛发光泽变差，体重增长较C组缓慢。造模完成后P组小鼠较C组体型小，体重轻。造模过程中P组死亡2只。2、小鼠结肠肌电的变化:P组小鼠结肠肌电在用药2W后较C组频率、振幅及频率、振幅变异系数无明显改变，持续用药6W后较C组频率(C组:19.33±1.74次/min，P组:10.85±0.92次/min)及振幅(C组:0.37±0.01mV，P组:0.22±0.02mV)均明显下降(P＜0.05)，频率、振幅变异系数明显增高(P＜0.05），12W后P组小鼠较C组结肠肌电的频率及振幅处于较低水平。3、小鼠肠道传输功能的变化:P组小鼠肠道传输功能在造模过程中出现动态变化。用药2-4W后肠道传输功能（C组:59.4±1.9％，P组:68.8±1.2％）明显增加（P＜0.05），用药6-8W后P组小鼠肠道传输功能（C组:57.4±0.9％，P组:50.4±2.4％）出现降低(P＜0.05），用药第10W(P组:60.5±0.9％)后肠道传输功能较第8W（P组:50.4±2.4％）时有所加快（P＜0.05），与C组相比较无明显差异，造模完成后D组小鼠肠道传输功能(P组:C组:58.9±0.9％，39.6±1.2％)显著下降(P＜0.05）。4、小鼠结肠大体以及HE染色观察:用药12W后P组小鼠全结肠长度及管径较C组减小;小鼠结肠HE染色见P组用药2W后较C组结肠粘膜厚度变薄，粘膜结构紊乱，粘膜陷凹变浅，肌层无明显改变;用药12W后P组小鼠结肠粘膜水肿明显，粘膜上皮有脱落现象，粘膜下层有大量炎性细胞浸润，肌层无明显变化。5、小鼠结肠ICC的数量变化:P组小鼠结肠ICC的数量（C组:10.9±0.7％，P组:7.7±1.0％）在开始应用大黄素第6W出现下降，第10-12W(P组:3.2±0.6％)显著下降(P＜0.05)，处于较低水平。12W内C组无明显动态变化。6、小鼠血清SCF的动态变化:P组小鼠血清SCF第4W(C组为:81.3±2.1pg/ml，P组为:71.2±2.5pg/ml)开始下降，第6周(55.8±1.9pg/ml)显著下降(P＜0.05），第8W后(27.5±3.6pg/ml)持续处于较低水平。12W内C组无明显动态变化。7、结肠组织c-Kit蛋白的动态变化:P组小鼠结肠组织c-Kit蛋白第4W(P组/C组:0.82±0.03)开始持续下降，第8W(P组/C组:0.65±0.04)后明显降低(P＜0.05)。12W内C组无明显动态变化。　　结论:1、中药大黄提取物单体大黄素可成功建立小鼠泻剂结肠模型。因单体大黄素纯度高、成分单一，故该模型具有更好的可控性及可重复性;2、大黄素致泻剂结肠形成过程中肠道动力出现先增加后降低的动态变化;3、大黄素致泻剂结肠形成过程中小鼠结肠ICC的数量是缓慢下降的过程，且SCF及c-Kit早于ICC出现变化，提示SCF/c-kit信号通路对ICC可能有调控作用。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

实验结果

1．小鼠服用单体大黄素后一般情况观察

2．结肠肌电检测

3．肠道传输功能检测

4．小鼠结肠变化

5．HE染色

6．结肠ICC数量观察

7．血清SCF检测

8．结肠组织中c-Kit蛋白的含量检测

讨论

结论

参考文献

英文缩略词表

致谢

泻剂结肠的研究进展 综述

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