声明
符号说明
第一章 绪 论
1.1 β-内酰胺类抗生素及其作用机制
1.1.1 β-内酰胺类抗生素的发现与发展
1.1.2 β-内酰胺类抗生素的结构与分类
1.1.3 β-内酰胺类抗生素的作用机制
1.2 细菌对 β-内酰胺类抗生素的耐药机制
1.2.1 合成 β-内酰胺酶
1.2.2 修饰 β-内酰胺类靶标 PBPs
1.2.3 改变细胞通透性
1.2.4 提高药物外排泵表达
1.3 AmpR介导的 β-内酰胺酶诱导表达
1.3.1 肽聚糖循环过程
1.3.2 革兰氏阴性菌经典的 ampR-ampC 调控系统
1.4 双组分系统介导的 β-内酰胺酶诱导表达
1.4.1 双组分系统的磷酸化信号传递机制
1.4.2 气单胞菌中 β-内酰胺酶表达的调控
1.4.3 弧菌中 β-内酰胺酶表达的调控
1.4.4 双组分系统介导的其他 β-内酰胺类耐药机制
1.5 希瓦氏菌对 β-内酰胺类抗生素的耐药机制
1.5.1 希瓦氏菌研究进展
1.5.2 希瓦氏菌 β-内酰胺酶诱导表达机制
1.6 选题意义、研究内容及技术路线
1.6.1 选题意义
1.6.2 研究内容及技术路线
第二章 利用转录组测序技术挖掘blaA诱导表达关键调控蛋白
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 供试菌株及培养条件
2.2.2 实验仪器
2.2.3 实验试剂
2.2.4 建库测序
2.2.5 数据质控
2.2.6 基因表达定量及差异分析
2.2.7 GO和 KEGG Pathway 分析
2.2.8 RNA提取及荧光定量 PCR
2.3 结果与分析
2.3.1 转录组测序样本的设置
2.3.2 数据质控及生物学重复性评估
2.3.3 组间差异表达基因鉴定
2.3.4 差异表达基因的 GO富集分析
2.3.5 实验组差异表达基因聚类
2.3.6 实验组共同显著上调基因分析
2.3.7 实验组共同显著下调基因分析
2.3.8 实验组差异变化基因分析
2.3.9 转录组测序可靠性验证
2.4 本章小结与讨论
第三章 双组分系统SbrKR 介导blaA的诱导表达
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 供试菌株、质粒和培养条件
3.2.2 引物
3.2.3 实验试剂及配方
3.2.4 构建框内缺失突变菌株
3.2.5 构建回补菌株
3.2.6 氨苄青霉素敏感性测定
3.2.7 生长曲线测定
3.2.8 RNA提取及荧光定量 PCR
3.2.9 启动子活性测定
3.2.10 BlaA酶活测定
3.2.11 磷酸化位点突变和 His-tag菌株构建
3.2.12 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
3.2.13 Western blot和 Phos-tag联用
3.3 结果与分析
3.3.1 S. oneidensis 中 β-内酰胺酶诱导表达关键调控蛋白的确定
3.3.2 SbrKR 缺失后细菌丧失在氨苄青霉素中生长的能力
3.2.3 SbrKR 缺失影响菌株中 blaA的表达
3.3.4 SbrKR 缺失影响菌株中 BlaA酶活性
3.3.5 SbrK和 SbrR 蛋白结构分析
3.3.6 SbrKR 诱导 blaA 表达依赖于保守的磷酸化位点
3.3.7 SbrR 磷酸化信号传递机制探究
3.3.8 肽聚糖循环酶介导的 blaA 表达依赖于 SbrKR
3.4 本章小结与讨论
第四章 SbrR 调控靶基因的作用机制研究
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 供试菌株、质粒和培养条件
4.2.2 引物
4.2.3 实验试剂及配方
4.2.4 构建框内缺失突变菌株
4.2.5 启动子活性测定
4.2.6 细菌基因 RACE 扩增
4.2.7 blaA 启动子截短实验
4.2.8 蛋白的提取和纯化
4.2.9 凝胶阻滞实验
4.2.10 RNA提取和荧光定量 PCR
4.3 结果与分析
4.3.1 SbrKR 的自调控与信号特异性
4.3.2 细菌基因 RACE 扩增寻找 blaA 转录起始位点
4.3.3 blaA 启动子截短实验寻找 DNA结合序列
4.3.4 凝胶阻滞实验检测 SbrR 是否结合 blaA 启动子
4.3.5 调控蛋白 SbrR 靶基因的鉴定
4.3.6 生物信息学分析寻找 SbrR 结合序列
4.4 本章小结与讨论
第五章 总结与展望
5.1 总结
5.1.1 转录组测序分析
5.1.2 SbrKR调控 β-内酰胺酶表达
5.1.3 生物信息学分析 SbrKR
5.1.4 肽聚糖循环酶介导的 blaA 表达依赖于 SbrKR
5.1.5 SbrKR 的信号转导机制
5.2 创新之处
5.3 不足与展望
参考文献
附 录
附录 1 组间差异表达基因
附录 2 引物
致 谢
作者简介
1 作者简历
2 攻读硕士学位期间发表的术论文
学位论文数据集
浙江工业大学;
