miR-486靶向SRSF3对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖及凋亡调控作用的研究

目录

声明

主要符号对照表

第一章 奶山羊卵泡发育的研究进展

1.1 卵泡发育与颗粒细胞的研究

1.1.1 卵泡发育与闭锁

1.1.2 颗粒细胞与卵泡发育和闭锁

1.1.3颗粒细胞凋亡途径

1.2 MicroRNAs 的研究

1.2.1 MicroRNAs的产生

1.2.2 MicroRNAs与癌症的研究进展

1.2.3 MicroRNAs与调控卵巢功能的研究进展

1.2.4 MiR-486的研究进展

1.3 SRSF3的研究进展

1.3.1 SR家族的研究进展

1.3.2 SRSF3的功能

1.4 .研究的目的与意义

1.5 技术路线

第二章 miR-486 对奶山羊卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的调控作用

2.1引言

2.2材料与方法

2.2.1 试验样品

2.2.2 仪器设备

2.2.3主要试剂

2.2.4 体外合成miR-486的模拟物

2.2.5原代奶山羊卵巢颗粒细胞的培养与转染

2.2.6 CCK-8法检测颗粒细胞活力

2.2.7 EdU法检测细胞增殖率

2.2.8 流式法检测细胞凋亡

2.2.9 RNA提取及反转录

2.2.10 Real time-qPCR

2.2.11 Western blot 检测

2.2.12 统计与分析

2.3 结果与分析

2.3.1 miR-486在各组织的表达水平及其在颗粒细胞中的转染效率

2.3.2 miR-486对颗粒细胞活力及增殖的影响

2.3.3 miR-486对颗粒细胞凋亡的影响

2.3.4 miR-486对PIK3/AKT/mTOR 通路的影响

2.4讨论

2.5 小结

第三章 miR-486 通过SRSF3 对卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的调控作用

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.2.1 试验样品

3.2.2 仪器设备

3.2.3主要试剂

3.2.4 miR-486的靶基因预测

3.2.5荧光素酶报告载体的构建

3.2.6 HEK293T细胞的培养、转染以及荧光活性检测

3.2.7 SRSF3过表达载体的构建及干扰RNA的合成

3.2.8原代奶山羊卵巢颗粒细胞的培养与转染

3.2.9 CCK-8法检测颗粒细胞活力

3.2.10 EdU法检测细胞增殖率

3.2.11 流式法检测细胞凋亡

3.2.12 RNA提取及反转录

3.2.13 Real time-qPCR

3.2.14 Western blot 检测

3.2.15 统计与分析

3.3 结果与分析

3.3.1 SRSF3在奶山羊各组织器官的表达水平

3.3.2 miR-486与SRSF3的靶向关系验证

3.3.3 构建SRSF3过表达载体

3.3.4 SRSF3过表达及干扰RNA的表达效率

3.3.5 SRSF3对颗粒细胞活力及增殖的影响

3.3.6 SRSF3对颗粒细胞凋亡作用的影响

3.3.7 miR-486通过SRSF3对颗粒细胞增殖的调控作用

3.3.8 miR-486通过SRSF3对颗粒细胞凋亡的调控作用

3.4 讨论

3.5 小结

研究结论

创新点

进一步研究的问题

参考文献

附录

致谢

个人简历