口服稳定型乙醛脱氢酶2(ALDH2)的突变设计

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第一章 绪论

1.1概述

1.1.1人体内酒精代谢过程

1.1.2解酒药物的发展现状

1.2乙醛脱氢酶2的研究现状

1.2.1乙醛脱氢酶2的来源

1.2.2乙醛脱氢酶2的基因多态性

1.2.3乙醛脱氢酶2的相关疾病

1.2.4乙醛脱氢酶2的制备方法

1.3突变设计

1.3.1突变设计的相关软件

1.4蛋白表达、鉴定、纯化技术

1.4.1蛋白表达技术

1.4.2蛋白质鉴定技术

1.4.3蛋白质分离纯化技术

1.5研究目的及意义

第二章 突变设计

2.1前言

2.2突变设计流程

2.2.1突变设计软件

2.2.1制备受体和配体文件

2.2.2 Repack

2.2.3确定配体结合位点

2.2.4突变设计

2.3结果与讨论

2.3.1 受体和配体文件

2.3.2 确定配体结合位点

2.3.3 突变设计

2.4本章小结

第三章 重组蛋白的表达

3.1前言

3.2实验材料和方法

3.2.1主要试剂

3.2.2仪器设备

3.2.3主要溶液配制

3.2.4 重组蛋白的诱导表达

3.2.5 SDS-PAGE

3.2.6 重组蛋白的条件优化

3.2.7 蛋白含量分析

3.2.8 Western Blot 蛋白印迹鉴定

3.3 结果与讨论

3.3.1重组蛋白的表达条件优化

3.3.2突变蛋白与野生型蛋白的表达

3.3.3可溶表达蛋白的含量分析

3.3.4突变蛋白与野生型蛋白的鉴定

3.4 本章小结

第四章 重组蛋白的复性与纯化

4.1 前言

4.2 实验材料和方法

4.2.1 实验材料

4.2.2 仪器与设备

4.2.3 主要溶液配制

4.2.4 重组蛋白的制备

4.2.5野生型ALDH2的纯化及复性

4.2.6 突变型重组蛋白的纯化

4.2.7 蛋白浓度测定

4.3 结果与讨论

4.3.1亲和层析条件的优化

4.3.2 野生型ALDH2 的亲和层析纯化

4.3.3 野生型ALDH2 的复性

4.3.4突变蛋白的亲和层析纯化

4.3.5蛋白含量的测定

4.4 本章小结

第五章 重组蛋白的稳定性及酶活研究

5.1 前言

5.2 实验材料和方法

5.2.1 实验材料

5.2.2 主要仪器

5.2.3 主要溶液配制

5.2.4ALDH2在模拟消化液中的稳定性研究

5.2.5 重组蛋白的最适反应温度及pH

5.2.6 重组蛋白的酶活性

5.2.7 重组蛋白的热稳定性分析

5.3结果与分析

5.3.1重组蛋白在消化液中的稳定性分析

5.3.2最适反应温度及pH分析

5.3.3酶活性分析

5.3.4热稳定性分析

5.4 本章小结

第六章 总结与展望

参考文献

致谢

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