海枫藤抗类风湿性关节炎的活性成分研究

摘要

目的：分离海枫藤藤茎中 C21甾体苷类化合物，以MTT法测定其对体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的抑制作用，为进一步研究开发抗类风湿性关节炎新药提供科学依据。　　方法：1.化合物的提取分离海枫藤干燥藤茎用95％乙醇回流提取，提取物经氯仿萃取，得到C21甾体总苷。经硅胶柱层析和高效液相柱层析，分离化合物。　　2.化合物的结构鉴定通过IR、ESI-MS、HR-ESI-MS、13C-NMR、1H-NMR、DEPT、HMQC、HMBC等现代波谱技术鉴定化合物结构。　　3.佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞体外培养试验采用 MTT法测定药物对体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的抑制作用。　　结果：1.从海枫藤的干燥藤茎中分离得到C21甾体总苷、流分Fr5、Fr9以及5个单体化合物：化合物Ⅰ、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ和化合物Ⅴ。　　2.化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的化学结构：化合物Ⅰ为12-O-桂皮酰基-20-O-乙酰基（20S）-孕甾烷-6-烯-3β,5α,8β,12β,14β,17β,20-庚醇3-O-甲基-6-去氧-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷（12-O-cinnamoyl-20-O-acetyl（20S）-pregn-6-ene-3β,5α,8β,12β,14β,17β,20-heptanol3-O-methyl-6-deoxy-β-D-allopyranosyl-（1→4）-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside），化合物Ⅱ为12-O-桂皮酰基-20-O-乙酰基（20S）-孕甾烷-6-烯-3β,5α,8β,12β,14β,17β,20-庚醇3-O-β-D-黄夹吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷（12-O-cinnamoyl-20-O-acetyl（20S）-pregn-6-ene-3β,5α,8β,12β,14β,17β,20-heptanol3-O-β-D-thevetopyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside），化合物Ⅲ为12-O-烟酰基-肉珊瑚苷元3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-3-O-甲基-6-去氧-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷（12-O-nicotinoylsarcostin3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-3-O-methyl-6-deoxy-β-D-allopyranosyl-（1→4）-β-D-oleandropy-ranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside），化合物Ⅳ为12-O-桂皮酰基-20-O-乙酰基（20S）-孕甾烷-6-烯-3β,5α,8β,12β,14β,17β,20-庚醇3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-3-O-甲基-6-去氧-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷（12-O-cinnamoyl-20-O-acetyl（20S）-pregn-6-ene-3β,5α,8β,12β,14β,17β,20-heptanol3-O-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-3-O-methyl-6-deoxy-β-D-allopyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside）。　　3．体外细胞培养试验表明，海枫藤总苷、流分Fr5、Fr9和化合物Ⅰ、Ⅱ能抑制体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖，其中，流分Fr5、Fr9在100μg/ml的浓度作用下，抑制率分别为99.14%、95.00%，化合物Ⅰ、Ⅱ在100μg/ml的浓度作用下，抑制率分别为52.28%、59.51%。　　结论：1.从海枫藤中分离得到5个C21甾体苷类化合物，通过HR-ESI-MS、1H NMR、13C NMR、DEPT、1H-1H COPY、HMQC和HMBC等现代波谱分析，确定了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的化学结构，其中化合物Ⅱ、Ⅲ为首次从该植物分离得到，化合物Ⅰ、Ⅳ为新化合物，并分别命名为海枫藤苷A（Haifengtenoside A）、海枫藤苷B（HaifengtenosideB）。　　2.化合物Ⅰ、Ⅱ均具有抑制体外佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的作用。

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前言

第一部分：海枫藤化学成分的分离与结构鉴定

一、材料与方法

(一) 材料

(二) 方法

二、结果

(一) 化合物的提取分离

(二) 化合物的结构鉴定

三、小结

第二部分 海枫藤对体外培养佐剂性关节炎滑膜细胞的作用

第一节 佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞体外培养

一、材料与方法

二、结果

三、小结

第二节 海枫藤对体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的抑制作用

一、材料与方法

二、结果

三、小 结

分析与讨论

结论

参考文献

附图、附表

致谢

文献综述