活细胞染料CFSE在人γδT细胞增殖及分泌细胞因子研究中的应用

摘要

目的：1.建立活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluoresceindiacetate，succinimidylester,CFDA-SE，也简称为CFSE)染色流式细胞术检测淋巴细胞增殖的方法。2.应用活细胞荧光染料CFSE染色和流式细胞术检测方法观察不同激活剂包括结核杆菌抗原(Mtb-Ag)激活人外周血T细胞后各亚群的增殖反应动力学。3.观察Mtb-Ag激活人外周血中γδT细胞产生白介素2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)与细胞增殖动力学的相互关系。 结论：1以CFSE标记淋巴细胞，用流式细胞术可有效检测出不同T细胞亚群对不同刺激剂的增殖反应以及增殖动力学。2γδT细胞在细胞因子分泌过程中，主要以产生IFN-γ为主。

目录

论文说明：英文缩略词表

1前言

2材料和方法

2.1细胞来源

2.2主要试剂(试剂浓度和配制方法)

2.3主要仪器和设备

2.4外周血单个核细胞(PBMC)的分离

2.5 CFSE标记外周血单个核细胞(PBMC)

2.6外周血单个核细胞(PBMC)活化培养

2.7流式细胞术检测和分析T淋巴细胞亚群增殖及细胞因子的方法

2.8统计学处理

3结果

3.1不同浓度CFSE染色后T细胞各亚群的荧光强度

3.2 PHA，CD3mAb刺激PBMC后T细胞各亚群比例

3.3 Mtb-Ag刺激PBMC后γδ T细胞的扩增

3.4 PHA，CD3mAb，Mtb-Ag激活T细胞后各T细胞亚群的增殖动力学

3.5 Mtb-Ag活化后的PBMC经PMA+Ionomycin刺激IL-2和IFNγ分泌情况

4讨论

4.1以CFDA-SE标记方法研究淋巴细胞增殖的探讨

4.2 Mtb-Ag特异性活化γδT细胞

4.3γδ T细胞内IL-2和IFN-γ的检测

5结论

6参考文献

7附录

8致谢

9综述：NF-κB在免疫调节中的作用