重度烟雾吸入后大鼠的免疫应答对肺损伤以及MOF的影响及其机制的初步探讨

摘要

气道炎症是一种特殊的免疫反应。烟雾中含有大量的无机及有机颗粒物，化学混合气体抑制了肺的防御机制，使细胞介导的免疫受抑。我们先前的实验已证明了：重度烟雾吸入导致大鼠明显的气道炎症、ALI乃至MOF的发生。尽管炎症反应是一种重要的免疫反应，对宿主的生存很重要，但它总是伴随许多形式的损伤，国外实验已明确，ALI中引起肺泡巨噬细胞分泌的IL-1β、TNF-α在肺内浓度的增加，可能直接或间接地中介了炎性的肺组织损害。而这种免疫功能的抑制与血单核细胞的失活及循环CD4+T淋巴细胞数的减少有关。国内外大量报道已明确，细胞因子是急性炎性反应综合征、多器官功能紊乱的直接介质。 研究表明：参与天然免疫的细胞和分子在很大程度上参与特异性免疫应答的启动，并影响免疫应答的强度、类型、免疫记忆形成与维持等<'[8]>。已证明巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞均有助于IL-12的早期生成心<'[2]>。细胞免疫是由T淋巴细胞介导的特异性免疫，不同T细胞亚群对感染所起的不同作用，与其所产生的细胞因子谱不同有关<'[9]>。一些证据表明，CD<,4><'+>、CD<,8><'+> T细胞协同对抗感染。CD<,4><'+> T细胞是免疫应答和调节中处于核心地位的淋巴细胞，也是急性肺损伤中的效应细胞<'[10]>。除了可以产生IFN-γ，CD<,8><'+> T细胞的防御保护作用还因为其具有细胞溶解的作用。 TNF-α主要是由单核细胞及巨噬细胞产生的致炎因子，作为一个早期效应子，协同其它一些细胞因子放大了炎性反应，推动了ALI的发生<'[6]>。IFN-γ分泌的增加可引起氧爆发及刺激中性粒细胞的ROS的产生从而加重ALI，激活的Mφ产生IL-6的增加也加重的ALI<'[11]>。IL-10由激活的TH2细胞和Mφ产生，已发现它会抑制AM活化和细胞因子的产生以及细胞中介的TH反应，所以IL-10能下调过度的肺免疫应答并减轻肺组织的炎性损伤<'(12)>。 淋巴细胞的凋亡导致免疫细胞的明显的减少，而这正是引起肺特异性免疫反应的前提<'[13]>，而且免疫功能的受抑与血液中CD<,4><'+>T细胞的减少有关<'[14]>。国外报道<'[15]>，ALI可引起总淋巴细胞、CD<,4><'+>T细胞的凋亡，所以特异性免疫必需的淋巴细胞的减少可能也是导致ALI后大鼠免疫功能的下降的一个重要原因。对感染的免疫反应诱导了一个复杂的肺部级连反应(SIRS)，而这种反应可能导致肺损伤及MOF<'[16，17]>。 为了分析火器伤致重度吸入性肺损伤后肺的自然免疫和特异性免疫反应，并试对这种免疫反应对ALI及MOF发生及发展可能的影响做进一步探讨，为此，我们分别复制了高浓度(4000ppm)及低浓度(2000ppm)烟雾吸入后的大鼠的实验动物模型。在损伤后24小时内的不同时相点分别观察上述两组致伤组肺的病理组织学、一些重要脏器的生化指标、致炎及抑炎细胞因子的浓度、淋巴细胞亚群数以及CD<,4><'+>/CD<,8><'+>的比率。并将观察结果与对照组进行比较。

目录

论文说明：缩略词表

声明

1前言

2实验材料

2.1动物

2.2药品与试剂

2.3仪器与设备

3实验方法

3.1动物致伤及分组

3.2血液样品的收集

3.3支气管肺泡灌洗液的(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)收集

3.4病理检查及组织的湿重/干重比

3.5指标检测方法

3.5.1肺损伤的生化指标--BALF中白蛋白及乳酸脱氢酶(lactateduehydrogenase, LDH )测定

3.5.2BALF中肿瘤坏死因子-α的(TNF-α)ELISA法测定

3.5.3夹心法FLISA检测BALF中IL-6

3.5.4夹心法ELISA检测BALF中IL-10：

3.5.5BALF中IFN-γ的ELISA测定

3.5.6血清ALT、AST、URA、CRE的测定方法

3.5.7肌酸激酶同工酶(CK-MB)的测定方法

3.5.8三角色细胞仪进行细胞分选分析

3.5.9肺病理组织切片的制备

3.5.10数据处理

4.实验结果

4.1肺组织病理形态学观察

4.2肺损伤的判断指标

4.2.1肺湿/干重比

4.2.2BALF中白蛋白及LDH含量

4.3 2000ppm、4000ppm时BALF上清液中TNF-a、IL-6、IFN-γ、IL-10的浓度

4.42000ppm(A组)、400ppm(B组)大鼠致伤后肝、肾、功能指标变化

4.5外周血及BALF中T细胞、B细胞、淋巴细胞及非淋巴白细胞数，以及外周血中CD4+/CD8+比率

5讨论

小结

参考文献

附录

致谢

综述 免疫应答与肺损伤、多脏器功能损害