黄蜀葵总黄酮抗脑卒中后抑郁作用及部分机制研究

摘要

脑卒中后抑郁(Post stroke depression,PSD)是指脑卒中后引发的抑郁症，是脑卒中后常见并发症。黄蜀葵总黄酮(Total flavone of Abelmoschus manihotL．Medic,TFA)是从锦葵科植物黄蜀葵中提取的一类有效成分，其主要活性成份为金丝桃苷(Hyperin,Hyp)、槲皮素和槲皮素苷。我室前期研究表明TFA和Hyp均具有脑缺血保护作用，其作用机制可能与抗脂质过氧化等有关。但有关TFA抗PSD作用尚未见报道。本课题主要研究TFA抗PSD作用及部分作用机制。主要实验结果如下： 1TFA对PSD大鼠模型的影响采用线栓法阻断右侧大脑中动脉(Middle cerebral artery,MCA)1h后再灌注制备局灶性脑缺血模型，在此基础上复合慢性应激和孤养，制备 PSD 大鼠模型。术后动态监测大鼠的体重变化，采用敞箱实验观察大鼠的行为学改变，通过糖水消耗量测定检测大鼠对奖赏的反应程度。结果显示，TFAI(50,100mg/kg,qd×24d)可不同程度增加PSD大鼠体重，提高水平运动和垂直运动得分，增加糖水消耗量，表明TFA可不同程度地改善PSD大鼠的抑郁状态，使体重相对增加，活动增多，糖水消耗量增加，表现较好的抗抑郁效应。 2 TFA的抗脂质过氧化作用应用紫外分光光度计法检测脑组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase,SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-Px)活性。结果表明，TFA(50，100mg/kg，qd×24d)能抑制PSD大鼠脑组织中升高的MDA含量，并提高GSH-Px活性；TFA(25，50，100mg/kg，qd×24d)可不同程度提高PSD大鼠脑组织中SOD活性。提示TFA具有抗脂质过氧化作用，这可能与它发挥抗PSD效应密切相关，是重要机制之一。 3 TFA对血液流变学的改善作用用R-80锥板型血液流变检测仪测定各切变率下全血粘度、血浆粘度、红细胞压积以及红细胞变形指数。结果显示，TFA(50，100mg/kg，qdx24d)能抑制 PSD 大鼠中、高切变率下全血粘度的升高，并能显著提高红细胞的变形性；TFA(100mg/kg，qd×24d)能抑制PSD大鼠低切变率下全血粘度和血浆粘度的升高。提示TFA对PSD大鼠的血液流变学具有明显的改善作用，这可能是其抗PSD重要机制之一。 4 TFA对下丘脑-垂体-肾上腺(Hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)轴功能的改善作用． 采用放射免疫分析法检测PSD大鼠血浆ACTH和皮质醇浓度；应用免疫组织化学法检测PSD大鼠下丘脑室旁核(Paraventricular nucleus，PVN)中促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin releasing factor,CRF)的表达；应用半定量逆转录聚合酶链反应法检测PSD大鼠下丘脑CRFmRNA的表达。结果显示，TFA(25，50，100mg/kg，qd×24d)可不同程度地抑制PSD大鼠血浆ACTH和皮质醇浓度的增高；TFA(50，100mg/kg，qd×24d)可明显降低PSD大鼠PVN中CRF阳性神经元的平均光密度值，并抑制PSD大鼠下丘脑CRFmRNA的过度表达。表明TFA可有效抑制HPA轴的过度激活，这可能是它发挥抗PSD效应的重要机制。 结论：TFA对大鼠PSD模型具有明显的抗抑郁作用，其机制可能与其抗脂质过氧化、改善血液流变学以及抑制HPA轴的过度激活有关。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

1前言

2实验材料

2.1动物

2.2药品与试剂

2.3实验仪器

3实验方法

3.1大鼠PSD模型

3.1.1分组及给药方法

3.1.2大鼠局灶性脑缺血模型的制备

3.1.3慢性不可预见的应激(Chronic unpredictable stress,CUS)模型

3.1.4体重测定

3.1.5敞箱实验

3.1.6糖水消耗量测定试验

3.2脂质过氧化指标测定

3.3血液流变学测定

3.4 HPA轴指标测定

3.4.1血浆促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic hormone,ACTH)浓度的测定

3.4.2血浆皮质醇浓度的测定

3.4.3免疫组化法检测下丘脑室旁核(Paraventricular nucleus,PVN)内CRF的表达

3.4.4半定量逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测PSD大鼠下丘脑CRFmRNA表达

3.5统计学处理

4实验结果

4.1 TFA对PSD模型大鼠的影响

4.1.1大鼠PSD模型的成功率和死亡率

4.1.2 TFA对PSD大鼠体重的影响

4.1.3 TFA对PSD大鼠敞箱实验的影响

4.1.4 TFA对PSD大鼠糖水消耗量的影响

4.2TFA对PSD大鼠脑组织MDA含量以及SOD、GSH-Px活性影响

4.3 TFA对PSD大鼠血液流变学的影响

4.4 TFA对PSD大鼠HPA轴的影响

4.4.1 TFA对PSD大鼠血浆ACTH和皮质醇浓度的影响

4.4.2TFA对PSD大鼠下丘脑室旁核CRF平均光密度值的影响

4.4.3 TFA对PSD大鼠下丘脑CRFmRNA表达的影响

5讨论

6小结

参考文献

附录

致谢

综述 脑卒中后抑郁的研究现状及治疗进展