银杏叶总黄酮对豚鼠肠系膜下神经节细胞ls-EPSP的影响

摘要

应用细胞内生物电记录技术，在豚鼠肠系膜下神经节上，观察了银杏叶总黄酮(TFG)对豚鼠肠系膜下神经节(IMG)细胞迟慢性兴奋性突触后电位(ls-EPSP)的影响；并通过应用相应的受体阻滞剂、低Ca<'2+>/N Mg<'2+>、低Na<'+>等Krebs液灌流，分析并探讨TFG影响IMG细胞ls-EPSP的可能机制，主要结果如下： 1.IMG细胞一般电生理学特性豚鼠肠系膜下神经节(IMG)细胞静息电位(RP)为(-53.1±6.5)my(n=192)，膜电阻(R<,m>)和膜电导(G)的均值分别为(42.6±3.3)MΩ和(23.6±1.8)nS；膜电容(Cm)为(471.2±36.5)pF，膜时间常数(τ)为(1.8±0.8)ms(n=110)；直接胞内刺激引起的动作电位幅度(APA)和时程(APD)分别为(60.1±4.6)mV和(2.5±0.4)ms，锋电位后超极化电位幅度(AHPA)和时程(AHPD)分别为(-13.1±2.0)mV和(42.1±8.4)ms(n=110)；刺激与IMG相连的腹下神经(HN)引起的快兴奋性突触后电位(f-EPSP)幅度和时程分别为(13.8±2.3)mV和(37.6±10.1)ms；刺激腹下神经(HN)引起的节后 AP 的 APA 和 APD分别为(65.3±4.5)mV 和(2.5±0.3)ms，AHPA和AHPD分别为(-9.6±1.4)mV和(29.3±2.5)ms(n=100)。 2.TFG对IMG细胞迟慢兴奋性突触后电位的影响2.1 IMG细胞迟慢兴奋性突触后电位重复电刺激(10V、1ms、20Hz，4s)与IMG相连的 HN，在IMG有61.1％(33/54)的细胞可诱发1s-EPSP，其电位的幅度与时程分别为(7.7±1.8)mV 和(97.4±17.4)s(n=33)，该电位可被低Ca<'2+>/高Mg<'2+>Krebs液可逆性阻断，但不受胆碱能(阿托品、六烃季胺)、肾上腺素能受体阻断剂(酚妥拉明、心得安)的影响，表明 ls-EPSP是一种非胆碱能、非肾上腺素能突触后电位。 2.2 TFG对豚鼠 IMG 细胞IS-EPSP的影响用 TFG(100，300，500mg/L)灌流，其中有78.8％(26/33)细胞的ls-EPSP出现抑制，幅度与时程均表现降低和缩短，且表现一定的剂量依赖性；另有21.2％(7/33)的细胞无明显反应。 3 TFG抑制豚鼠 IMG 细胞 ls-EPSP的机制分析3．1 TFG抑制豚鼠 IMG 细胞 ls-EPSP的离子机制灌流低Na<'+>(58mmol/L)、高K<'+>(20mmol/L)的Krebs液和Na<'+>通道阻断剂河豚毒(TTX，10μmol/L)均可增强TFG引起的 ls-EPSP的抑制作用，用K<'+>通道阻断剂四乙基铵(TEA，1mmol/L)灌流IMG细胞，可使TFG的抑制作用减弱。上述结果表明TFG对ls-EPSP的抑制作用可能与增强K<'+>外流，抑制Na<'+>内流有关。 3．2 TFG抑制豚鼠 IMG 细胞 IS-EPSP 的突触传递机制由TFG引起的 ls-EPSP 的抑制可被低 Ca<'2+>/高Mg<'2+> Krebs 液可逆性阻断，但不受胆碱或肾上腺素受体阻断剂影响，推测TFG的抑制作用可能与影响介导ls-EPSP神经递质的释放或相应的受体结合有关。试就以下几个方面分析TFG对ls-EPSP抑制的机制。 3．2．1 5-HT 引起的去极化反应在能够引出 ls-EPSP 的 IMG 细胞中(n=33)，用5-HT(100 μmol/L，30s)灌流，其中有72.7％(24/33)的细胞可诱发缓慢去极化反应，其余细胞无明显反应，5-HT 去极化反应不受低钙高镁溶液及胆碱能或肾上腺素能受体阻断剂的影响，表明多数IMG细胞对5-HT敏感，推测在这些细胞膜上存在5-HT受体。 3．2．2 5-HT 引起的去极化反应与 ls-EPSP的关系 5-HT(100 μmol/L，30s)灌流IMG细胞可诱发缓慢的去极化反应，与重复电刺激HN引出ls-EPSP幅度和时程相比较，无明显差异：在应用5-HT(100μmol/L，30s)灌流IMG细胞后，重复电刺激(10V，1ms，20Hz，4s)HN所诱发的ls-EPSP表现幅度增大和时程延长(n=5)；连续应用5-HT(100μmol/L，10min)灌流5-HT敏感细胞致5-HT受体脱敏后，重复电刺激(10V，1ms，20Hz，4s)HN 所诱发的ls-EPSP幅度及时程显著降低；应用5-HT受体阻断剂赛庚啶(10μmol/L)灌流，ls-EPSP幅度及时程亦出现显著降低。上述结果表明5-HT可能为介导 ls-EPSP形成的递质之一。 3．2．3 TFG对5-HT引起的去极化反应的影响用 100，300，500 mg/L 的TFG灌流IMG 3min，对5-HT敏感的细胞去极化反应受到抑制，且表现一定的剂量依赖性。表明TFG对5-HT去极化有抑制作用，其机制可能是通过竞争5-HT与IMG细胞膜上相应的受体结合而实现的。TFG 对 5-HT 去极化抑制与其对ls-EPSP抑制的幅度相比较，无显著差异(P>0.05)。表明TFG对5-HT去极化和ls-EPSP抑制作用可能是通过同一途径实现的。3.2.4 5-HT 对TF8}印制的影响联合应用 5-HT(100μmol/L，30s)与TFG(100 mg/L，3min)灌流5-HT敏感细胞，其ls-EPSP的幅度与时程出现增大和延长，与单独应用TFG(100 mg/L，3min)灌流比较有明显差异(P<0.01)(n=5)。表明5-HT对TFG抑制有减弱作用。 3.2.5 5-HT受体脱敏对TFG抑制的影响联合应用5-HT(100μmol/L)与TFG(100 mg/L)灌流10min后，ls-EPSP的幅度与时程分别为(0.3±0.1)mV和(7.2±2.5)S与单独应用TFG(100 mg/L)比较有明显差异(P<0.01)，而与5-HT脱敏后比较无明显差异(P>0.05)(n=6)。TFG对ls-EPSP抑制作用可能与作用5-HT受体有关. 3.2.6 5-HT 受体阻断剂对TFG抑制的影响分别灌流赛庚啶(10μmol/L)、BRL24924(10μmol/L)和TFG(100mg/L)，在5-HT敏感细胞引起的5-HT去极化减弱，重复电刺激HN诱发的ls-EPSP的幅度和时程亦出现降低和缩短。分别联合灌流赛庚啶(10μmol/L)与TFG(100mg/L)、BRL24924(10μmol/L)与TFG(100mg/L)，可引起5-HT去极化进一步减弱，重复电刺激HN诱发的ls-EPSP幅度和时程也出现明显降低。推测TFG可抑制5-HT与相应的受体结合从而抑制了ls-EPSP的产生. 3.2.7 P物质和蛙皮素引起的去极化反应在重复电刺激引出的ls-EPSP细胞中，用蛙皮素、P物质(100 μmol/L，30s)灌流IMG细胞，分别有66.7％(12/18)、62.5％(10/16)的细胞可诱发缓慢的去极化反应，其余细胞无明显反应，两种物质引起的去极化反应均不受低钙高镁及胆碱或肾上腺素能受体阻断剂影响，表明在IMG细胞膜上也存在对P物质和蛙皮素敏感的受体。 3.2.8 TFG 对 P 物质和蛙皮素引起的去极化反应的影响应用100，300，500 mg/L的TFG灌流IMG 10min，蛙皮素、P物质(100μmol/L，30s)所引起的去极化反应均无明显改变。提示TFG对ls-EPSP的抑制反应可能与蛙皮素、P物质受体无关。 综上所述，本实验研究结果提示：TFG可不同程度的抑制IMG内大多数细胞的ls-EPSP，这可能与TFG抑制介导ls-EPSP产生的神经递质5-HT的释放以及与突触后膜上相应的受体结合有关，其作用的离子机制可能与Na<'+>内流减弱和K<'+>外流增强有关。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

摘要

1前言

2材料与方法

3实验结果

4讨论

5结论

参考文献

附录

致谢

文献综述 银杏叶总黄酮的药理学作用