人肺癌相关抗原单克隆抗体的制备及其识别抗原的亲和层析纯化

摘要

目的:研制抗人肺癌细胞(A549)单克隆抗体，对其生物学特性进行鉴定，并对其所识别的抗原进行免疫亲和层析纯化。 方法:采用B淋巴细胞杂交瘤技术，以人肺癌细胞系A549免疫Balb/c小鼠，常规融合，以间接ELISA方法筛选阳性克隆，有限稀释法亚克隆筛选单克隆细胞株，并对其进行核型、亚类、效价、特异性等特性鉴定，免疫组织化学法研究单克隆抗体在各种组织中的表达。裂解A549细胞，提取细胞总蛋白，采用EIASA方法筛选合适的细胞裂解液和洗脱液，将制备的人肺癌相关单克隆抗体与溴化氰活化的Sepharose 4B交联，进行免疫亲和层析，从体外培养的人肺癌A549细胞裂解液中纯化该单抗所识别的特异抗原，进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。 结果:成功获得了一株能够稳定分泌抗人肺癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株289，所分泌单克隆抗体的亚类为IgM，利用亲和层析纯化提取了其识别的肺癌相关抗原，分子量约为38KD。 结论:抗人肺癌相关抗原单克隆抗体289对肺癌的诊断有一定价值，亲和层析纯化得到的289识别抗原有可能成为一种新的肺癌肿瘤标志物，有望进一步用于肺癌的实验室诊断。

目录

论文说明：缩略词表

声明

第一部分 人肺癌相关抗原单克隆抗体的制备

1.前言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.结论

第二部分 人肺癌单克隆抗体识别抗原的亲和层析纯化

1.前言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.结论

对本课题的进一步设想

参考文献

致谢

附录

综述：SELDI蛋白质芯片在肿瘤标志物筛选中的应用进展