青藤碱对大鼠RA模型Th17及DC细胞MAPK信号通路关键蛋白磷酸化的影响研究

摘要

目的：　　探讨青藤碱对RA大鼠模型外周血及关节滑膜Th17相关细胞因子的影响，明确青藤碱对Th17细胞的作用；探讨青藤碱对DC细胞MAPK信号通路蛋白磷酸化的影响，明确青藤碱治疗RA的作用途径，进而探讨青藤碱通过MAPK信号通路蛋白磷酸化而对Th17致炎过程的影响，由此揭示青藤碱对RA大鼠模型的作用靶点及机制。　　方法：　　1、利用液相芯片技术检测血清中IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β等含量，分析青藤碱对外周血中Th17相关因子的影响。　　2、采用ELISA法和免疫组织化学法检测IL-10、MCP-1和关节滑膜部位IL-17的表达，观察并分析外周血与关节滑膜部位细胞因子的表达特征及青藤碱对该因子的影响。　　3、利用液相蛋白芯片技术检测 DC2.4细胞内 MAPK信号通路磷酸化蛋白p38MAPK、JNK/c-jun、ERK、MEK1，分析青藤碱对MAPK信号通路上关键蛋白质磷酸化的影响。　　结果：　　1、通过分析比较，与模型组相比，青藤碱中、低剂量组RA大鼠模型外周血中IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ的表达量明显降低，同时IL-10、TGF-β表达量明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。　　2、青藤碱作用于 DC2.4细胞后，蛋白质在不同时间点发生磷酸化的情况不同，P38MAPK在用药72h，青藤碱中、高剂量组磷酸化p38MAPK的量明显低于模型组；JNK在用药72h磷酸化JNK蛋白的量最少，青藤碱中、高剂量组活性JNK的量明显低于模型组；c-jun在用药72h磷酸化c-jun蛋白的量最少，青藤碱中、高剂量组活性c-jun蛋白的量最少，明显低于模型组，且JNK与c-jun磷酸化趋势一致；ERK在用药24h发生磷酸化的量最少，青藤碱中、高剂量组活性 ERK的量明显低于模型组； MEK1在用药72h，发生磷酸化的量最多，青藤碱各剂量组活性MEK1的量均明显高于模型组。　　结论：　　1、中、低剂量青藤碱可明显降低外周血中IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、MCP-1的含量，升高IL-10、TGF-β的含量，从而达到调节Th17细胞活性，治疗RA的目的。　　2、青藤碱可在作用一定时间内降低p38MAPK、JNK、c-jun、和ERK蛋白磷酸化程度，升高 MEK1的磷酸化程度，表明其可能通过影响 DC2.4细胞内p38MAPK、JNK、c-jun、和ERK蛋白磷酸化程度来调控其信号转导功能，影响细胞因子的分泌，调控T细胞的分化和活化，从而干扰RA的病理进程。　　3、青藤碱可通过影响DC2.4细胞内MAPK信号通路蛋白的活化来调控细胞因子的产生，降低 DC细胞提呈抗原的能力，调控辅助性 T细胞的分化、活化，来影响RA的发生发展。

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缩略语表

前言

第一部分：青藤碱对大鼠RA模型的有效性研究

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

第二部分：青藤碱对类风湿性关节炎大鼠模型Th17相关细胞因子的影响

1.实验材料

2.实验方法

3．实验结果

第三部分：青藤碱对小鼠树突状细胞MAPK信号通路蛋白磷酸化的影响

1.实验材料

2.实验方法

3．实验结果

讨论

1.祖国医学对类风湿关节炎的认识及治法

2.青藤碱治疗RA研究现状

3.RA中TLRs及DC研究现状

4.RA中Th17研究现状

5.MAPK信号转导途径

6.青藤碱治疗RA机制研究现状

7.青藤碱调节T细胞研究现状

8.课题研究目标

9.论文研究的主要内容及思路

10.实验结果分析

结论

创新性与特色

问题与展望

致谢

参考文献

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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