鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠治疗作用及部分机制研究

摘要

肝纤维化是以星状细胞(HSC)激活，细胞外基质(ECM)的合成大于降解导致肝内ECM过度沉积为特征的病理过程，是肝硬化的早期和必经阶段。导致肝纤维化的因素有很多，如病毒、药物、乙醇、缺氧、免疫因素等，都可损伤肝脏，造成炎症、细胞坏死、凋亡，进而发展成肝纤维化。现在研究认为，肝纤维病理过程是可逆的，因此寻找合适药物抑制和治疗肝纤维化具有重要意义。 鬼针草，菊科，鬼针草属，一年生草本植物。其药材资源非常丰富，广泛分布在我国大多数地区。鬼针草药用历史悠久，味苦、性平而无毒，具有清热解毒，散瘀消肿等功效，民间用于治疗痢疾、腹泻、肝炎、胃痛等疾病，文献显示鬼针草的醇提物有抗炎、清除自由基和免疫调节等作用。鬼针草活性成分很多，包括黄酮苷、皂苷、生物碱、挥发油等，经我院天然药物化学教研室研究确定，从鬼针草叶中提取的鬼针草总黄酮(total flavones 0f Bidens bipinnataL，TFB)为其有效部位。我们前期实验发现，TFB对CCl4诱导的小鼠肝损伤和大鼠化学性肝纤维化均有显著的治疗作用，但对大鼠免疫性肝纤维化是否有作用尚不清楚。为进一步探讨TFB的药理作用，本文在查阅大量文献和前期研究基础上，采用猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型方法，研究TFB对免疫性肝纤维化的治疗作用和部分机制。 1.TFB对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用48只大鼠，随机分为正常组、模型组、TFB 160 mg/kg、TFB 80 mg/kg、TFB 40mg/kg等6组，每组8只。除正常组外，其余各组采用腹腔注射猪血清(0.5 ml/只，每周2次)诱导免疫性肝纤维化模型，共12周，病理组织学检查造模情况。检验造模成功后，给药组分别灌服相应的受试药物，正常组和模型组灌服等容量的生理盐水，疗程10周。处死大鼠，常规方法取血、肝脏、脾脏等组织备检。研究发现，与模型组相比，TFB能增加大鼠体重，抑制肝纤维化大鼠肝、脾指数上升；能降低血清中升高的ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ和肝组织中Hyp含量；病理组织学结果显示TFB组肝脏组织结构明显改善，肝纤维化增生程度减轻。提示TFB对猪血清所致大鼠免疫性肝纤维化有明显的治疗。 2.TFB对免疫性肝纤维化治疗作用的部分机制研究与模型组比较，TFB能显著降低肝组织中MDA含量，升高肝组织中SOD和GSH-Px活性；免疫组织化学法显示，TFB组显著抑制肝组织中α-SMA、TGF-β1蛋白表达；RT-PCR显示TFB组抑制TGF-β1/Smads通路中TGF-β1，smads2 mRNA表达，升高smads7 mRNA表达；TUNEL和α-SMA双染检验细胞凋亡，显示TFB显著减少活化的HSC数目，可检测到其凋亡。提示TFB治疗实验性肝纤维化的作用可能与其抗脂质过氧化损伤和抑制TGF-β1/Smads通路减少体内HSC活化及诱导体内活化的HSC凋亡有关。 结论：以上实验结果表明，TFB对猪血清诱导的大鼠肝纤维化具有明显的治疗作用，其作用机制可能与抗氧化、抑制TGF-β1/Smads信号通路及诱导体内活化的HSC凋亡有关。

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摘要

前言

第一部分鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用

1.实验材料

2.实验方法

3.数据处理

4.实验结果

5.讨论

6.小结

第二部分鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化治疗作用的部分机制研究

1.实验材料

2.实验方法

3.数据处理

4.实验结果

5.讨论

6.小结

结论

参考文献

附录

致谢

综述 肝星状细胞(HSC)与肝纤维化