脑胶质瘤中ppENK基因启动子区的甲基化状态研究

摘要

目的:
　　表观遗传学修饰的DNA甲基化在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。肿瘤细胞的发生常存在多基因的异常甲基化现象,尤其是抑癌基因的高甲基化与脑胶质瘤的发生发展密切相关。本研究旨在采用巢氏聚合酶链反应(nPCR法)和亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP法)方法检测脑胶质瘤组织中候选抑癌基因ppENK基因启动子区的甲基化状态,探讨ppENK基因启动子的异常甲基化水平在脑胶质瘤发生发展中的作用以及与临床病理资料之间的关系。
　　方法:
　　采用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction nPCR)方法和亚硫酸氢盐修饰后测序法(Bisulfite sequence polymerase chain reaction BSP),检测32例脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中ppENK基因启动子区CpG岛的甲基化状态。利用所学统计学方法分析ppENK基因启动子的异常甲基化水平与临床病例资料(病理分级、年龄、性别、病理分型)之间的关系。本实验中32例脑胶质瘤标本均经病理证实,术前未进行放疗或化疗。10例正常脑组织标本来源脑外伤颅内减压手术患者。
　　结果:
　　10例正常脑组织中未检测到ppENK基因启动子甲基化现象。对实验组32例脑胶质瘤标本进行甲基化修饰及测序检测,其中13例检测出发生ppENK基因启动子甲基化,甲基化率为40.6％,远高于对照组(正常脑组织)的甲基化率0%(0/10),两者差异存在统计学意义(P=0.015)。低级别组(I-II级)和高级别(Ⅲ-IV级)胶质瘤中ppENK基因启动子甲基化率分别为21.1%和69.2%,通过分析表明两者之间存在统计学意义(P=0.006)。而ppENK基因的甲基化与性别、年龄、病理类型无明显相关性。
　　结论:
　　ppENK基因启动子的CpG岛在脑胶质瘤中存在高甲基化现象,可能与脑胶质瘤发生有关。ppENK基因启动子的甲基化状态与胶质瘤病理分级有关,与年龄、性别、病理分型无关。作为候选抑癌基因的ppENK甲基化在脑胶质瘤诊断、治疗方面有着重大意义。

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中文摘要

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前言

2 材料与方法

2.1 研究对象

2.2研实验所需仪器和试剂

2.2.1主要仪器

2.2.2主要试剂

2.3具体实验方法：

2.3.1提取组织DNA和测定DNA浓度

2.3.2 DNA甲基化修饰按EpiGENETEK one step DNA Modification kit步骤进行修饰

2.3.3巢氏PCR（nested PCR）

2.3.4 产物测序结果(Sequencing result)

2.4 统计学分析

3.结果

4 讨论

4.1 相关抑癌基因的甲基化与脑胶质瘤

4.2本实验所采用的实验方法

4.3 候选抑癌基因ppENK与脑胶质瘤

5结论：

参考文献

个人简历

致谢

综述

参考文献