乳源免疫调节肽对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及相关基因表达的影响

摘要

目的：研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及其相关基因表达的影响。
　　方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,分别使用浓度10-6、10-4、10-2g/L的PGPIPN与之孵育24、48h、72h,利用MTT法检测PGPIPN对其增值的影响,并用人正常肝细胞LO2作为对照,检测其细胞毒性作用;通过流式细胞技术分析PGPIPN对SKOV3细胞周期的影响;利用Hoechst33258染色法检测PGPIPN作用后SKOV3细胞凋亡情况;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时荧光定量 PCR法检测bax、bcl-xl、caspase-3 mRNA水平的表达量;Western blot方法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3蛋白表达量。
　　结果：1.MTT结果表明,不同浓度的PGPIPN对SKOV3细胞的增值有明显的抑制作用;2.细胞周期结果表明,与对照组相比,10-2、10-4g/L的PGPIPN作用SKOV3细胞48h和72h后,G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多(P<0.05);3. Hoechst33258染色结果表明:在10-2、10-4 g/LPGPIPN处理48h和72h后,SKOV3细胞明显缩小,细胞核染色质高度凝集,出现高亮荧光;4.cDNA表达谱芯片结果显示:PGPIPN低剂量组与正常对照组的比较中共得到1177个差异基因,其中上调基因791个,下调基因386个;高剂量组与正常对照组的比较中共得到744个差异基因,其中上调基因486个,下调基因258个;5. Real-timePCR结果表明:与对照组相比,bax mRNA水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);bcl-xl mRNA水平的表达量随着 PGPIPN浓度升高而降低(P<0.01); caspase-3 mRNA水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);6.Western blot分析结果表明:与对照组相比,Bax蛋白水平的表达量随着 PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05); Bcl-xl蛋白水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而降低(P<0.01);Caspase-3蛋白水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05)。
　　结论：1. PGPIPN能明显抑制SKOV3细胞的增值,诱导其凋亡,而对正常细胞无细胞毒性作用。2. PGPIPN通过促进细胞中bax的表达及抑制 bcl-xl的表达来调控SKOV3细胞的凋亡,该过程可能和caspase的活化相关。

目录

封面

声明

目录

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

1 前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2主要试剂

2.3 实验方法

3 结果

3.1 PGPIPN在体外对卵巢癌SKOV3细胞和人正常肝细胞LO2增殖作用的影响

3.2 细胞周期检测

3.3 Hochest33258核染色

3.4 cDNA表达谱芯片筛选结果

3.5 Real-time PCR

3.6 Western blot 分析

3 讨论

4 结论

参考文献

简 历

致谢

文献综述