早期高压氧治疗对兔颅脑爆炸伤后Caspase-3、CytC、Bax、Bcl-2表达变化的影响

摘要

目的：①成功复制兔颅脑爆炸伤动物模型。②研究兔颅脑爆炸伤及早期高压氧治疗(Hyperbaric Oxygen Treatment,HBOT)后大脑组织中Caspase-3、Cyt C(细胞色素C、cytochrome C)、Bax、Bcl-2的表达情况。③探讨早期高压氧治疗对兔颅脑爆炸伤后大脑组织中神经细胞凋亡的治疗作用以及可能的相关机制,为高压氧早期治疗在临床上的应用提供理论依据。
　　方法：成年新西兰大白兔150只,健康,雌雄不限,体质量2.0-2.5kg,按随机数字表法分成三组,即对照组,模型组,高压氧治疗组,其中对照组10只,模型组和高压氧治疗各为70只。模型组和高压氧治疗组按照取材的时间点不同又随机分为伤后1h、6h、12h、伤后24h、伤后3d、伤后7d,伤后14d组共14组,每组10只。模型组和高压治疗氧组采用自制雷管制作兔颅脑爆炸伤模型,对照组不行颅脑爆炸致伤,然后对高压氧治疗组采用早期高压氧治疗进行干预。各组在各实验时间点处死后取所需脑组织制作样本,样本制作完成后均采用免疫组化学技术检测各组兔大脑Caspase-3、Cyt C、Bax、Bcl-2的表达情况,并通过相关统计软件进行统计学分析。
　　结果：①Caspase-3在模型组致伤后1h出现明显表达,伤后24h达至高峰,随后开始下降,伤后7d仍维持较高水平(P﹤0.05),除14d外其余各时间点和对照组比较均有统计学意义(P﹤0.05);高压氧治疗组和模型组比较,除14d组其余各组均明显下调(P﹤0.05),但仍高于对照组。②模型组动物致伤后1h即出现Cty C表达上升,伤后12h时Cty C阳性表达最明显,伤后24h开始下降但仍维持较高水平(P﹤0.01);高压氧治疗组较模型组伤后早期(伤后1h,6h,12h,24h)相同时间点下降明显,但仍高于对照组(P﹤0.05)。③致伤后早期(伤后1h,6h,12h,24h)模型组Bax和Bc1-2较对照组表达均明显上调(P﹤0.05);高压氧治疗组相同时间段(伤后1h,6h,12h,24h)Bax的表达较模型组有所降低(P﹤0.05),但仍高于对照组,Bc1-2的表达较模型组有明显上调(P﹤0.05)。
　　结论：早期(伤后1~24h)Cyt C释放入胞质可能是兔颅脑爆炸伤后挫伤区周围大脑组织中细胞凋亡的关键步骤;经高压氧治疗早期(伤后1~24h)干预后,兔挫伤区周围脑组织中细胞凋亡调控蛋白Cyt C、促细胞凋亡蛋白Bax和凋亡标志Caspase-3表达明显下降,而抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达显著增加,表明早期高压氧干预对兔颅脑爆炸伤后挫伤区周围大脑组织中细胞凋亡的治疗作用可能是阻止伤后早期Cty C从线粒体释放进入胞质,其机制可能与抑制Bax表达,诱导Bc1-2表达上调有关。

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英文缩略词表

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前言

引言

1 材料与方法

1．1 实验动物及分组

1.2 主要仪器设备

1．3 主要试剂及仪器

1.4 模型制作

1.4 早期高压氧处理

1.5 脑组织石蜡切片的制备

1.6 免疫组化染色检测挫伤区周围脑组织中Caspase-3，Cyt C，Bax和Bcl-2的表达

1.7 统计学分析

2 实验结果

2.1 实验动物数量分析

2.2 兔颅脑爆炸伤后挫伤区脑组织Caspase-3免疫组化检测结果

2.3 兔颅脑爆炸伤后挫伤区脑组织Cyt C免疫组化检测结果

2.4 早期高压氧治疗抑制兔颅脑爆炸伤后挫伤区脑组织Caspase-3的表达

2.5早期高压氧治疗抑制兔颅脑爆炸伤后挫伤区周围脑组织Cyt C的表达

2.7 早期高压氧治疗促进兔颅脑爆炸伤后挫伤区脑组织Bcl-2的表达

3 讨论

3.1兔颅脑爆炸伤后Cyt C的表达与细胞凋亡的相关性

3.2早期高压氧治疗对兔颅脑爆炸伤后Caspase-3和Cyt C表达的影响

3.3早期高压氧治疗对兔颅脑爆炸伤后Bax和Bc1-2表达的影响

3.4早期高压氧治疗与细胞凋亡相关蛋白的相关性

3.5本实验的不足和展望

4 结论

全文总结

参考文献

附录1

附录2

致谢

综述