不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液内HSP70水平和肺损伤关系的研究

摘要

目的:研究支气管肺泡灌洗液中热休克蛋白70(HSP-70)、细胞因子在机械通气肺损伤中的作用机制。观察不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)内热休克蛋白(HSP-70)含量的变化;观察不同潮气量机械通气后BALF内细胞因子白介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)含量的变化,及其与BALF内热休克蛋白(HSP-70)含量的关系;观察不同潮气量机械通气后肺组织的肺损伤评分和凋亡指数,及其与BALF内热休克蛋白(HSP-70)含量的关系。
　　方法:雄性SD大鼠36只,随机分为3组,大潮气量机械通气组(HV)、小潮气量机械通气组(LV)、正常对照组(N)。大鼠麻醉后,颈部皮肤消毒后行气管切开插管固定,并以电热垫维持大鼠体温在37摄氏度左右。HV组,LV组均连接小动物呼吸机以行机械通气;N组保留自主呼吸室内空气,单笼饲养。HV、LV组潮气量(Vt)值分别为25ml/kg,7mL/kg,通气时间4h,吸呼比1:2。10％水合氯醛(0.3mL/kg)腹腔注射麻醉后,每半小时追加首剂的1/3,维持大鼠麻醉状态。在机械通风后,处死大鼠用生理盐水肺灌洗。收集的BALF经离心后,上清液分装保存在-80℃冰箱中以供将来使用。(1)BALF离心后,沉渣重新悬后,光学显微镜下用细胞计数板行白细胞计数,及涂片瑞氏染色后行白细胞分类计数;(2)采用BCA方法测定大鼠BALF中总蛋白质浓度的含量;采用ELISA方法测定大鼠BALF中HSP-70和IL-6、MIP-2的含量;(3)肺组织石蜡切片后行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察病理学变化及行肺损伤评分,评估肺组织的损伤程度;(4)采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL法)检测肺组织石蜡切片的细胞凋亡情况,评估肺组织细胞的凋亡指数。
　　结果:1.与正常对照组比较,小潮气量机械通气组和大潮气量机械通气组大鼠BALF中白细胞计数及中性粒细胞分类计数均显著性升高(P<0.05)。2.与正常对照组比较,小潮气量机械通气组和大潮气量机械通气组大鼠BALF中HSP-70、IL-6、MIP-2水平以及肺损伤病理评分、肺凋亡指数均显著性升高(P<0.05)。3.与小潮气量机械通气组比较,大潮气量机械通气组大鼠BALF中HSP-70、IL-6、MIP-2的水平以及肺损伤病理评分、肺凋亡指数也均显著性升高(P<0.05)。4.大潮气量机械通气组大鼠BALF中IL-6、MIP-2以及肺损伤病理评分别与HSP-70呈显著正相关(P=0.01,r=0.8538;P=0.01,r=0.8919;P=0.01,r=0.8852)。
　　结论:1)大潮气量机械通气可致肺上皮细胞损伤或坏死增加,HSP-70释放到气道内的量明显增加,促进细胞因子释放;而肺内炎症反应显著增强,可能进一步加重肺组织的损伤及细胞凋亡的发生。
　　2)小潮气量机械通气相对大潮气量机械通气,肺上皮细胞损伤或坏死程度较轻,HSP-70胞外释放及细胞因子较少,肺内炎症反应较轻,细胞凋亡少。
　　3)因此机械通气时,机械牵拉造成肺组织细胞的损伤,细胞内HSP-70释放入气道,促进细胞因子的释放,加重肺部炎症反应,促进肺组织细胞凋亡的发生。

目录

封面

声明

目录

缩略语中英文对照表

中文摘要

英文摘要

第一部分不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液中细胞因子水平和肺损伤关系的研究

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

第二部分 不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液中HSP70与细胞因子及HSP70与肺损伤关系的研究

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

展望

参考文献

附 录

致谢

综述