细菌感染小鼠肺炎模型及溶葡球菌酶治疗小鼠肺炎的药效学评价研究

摘要

细菌性肺炎(bacterialpneumonia)占医院各类病原体肺炎的80％。而在过去的半个世纪中,大量广谱或超广谱抗菌素投入临床并未使肺炎的死亡率下降,反而使得细菌的耐药率不断增高。有报告显示住院死亡病人约15%与肺炎有关。社区获得性肺炎(CAP)死亡率为5%-10%,而医院获得性肺炎(HAP)的病死率则高达20%-50%。
　　细菌性肺炎是感染性肺炎中较常见的类型,如果没有及时有效的治疗,严重细菌感染可以导致高死亡率。抗生素是治疗细菌感染性疾病最有效的武器,然而随着抗生素的滥用,细菌的耐药性问题日益加剧,抗生素的杀菌作用受到严峻挑战。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA)、广谱耐药嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia,SMA)、耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)和耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)等多重耐药菌是医院获得性感染的主要致病菌,其超强耐药性往往导致感染者不治身亡。
　　本研究利用临床分离鉴定的嗜麦芽窄食单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌建立了细菌感染小鼠肺部模型。在感染前注射免疫抑制剂地塞米松、环磷酰胺,造成小鼠自身的免疫抑制,以滴鼻的方式滴入新鲜菌液,时相性监测细菌感染后小鼠的临床症状、体重、体温、肺重、血细胞与组织病理学变化。结果显示,感染肺炎的模型组动物精神萎靡,活动较少,体温迅速降低,体重下降明显,肺重增加,免疫细胞(WBC、GRAN、LYM、MONO)处在极低水平,小鼠死亡率较高,肺部病理切片观察结果显示:实验结束小鼠肺组织结构明显异常,肺间质血管周围水肿、出血和坏死,肺泡腔炎性细胞浸润,肺组织存在明显的细菌集团。
　　为了获得重组溶葡球菌酶,构建了pQE30重组质粒载体,诱导表达后得到了目的蛋白,并且证明在体外有杀金黄色葡萄球菌的活性。同时以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠肺炎模型评价重组溶葡球菌酶治疗效果,通过对小鼠体重、体温、肺重、脾重、血细胞与组织病理学变化的时相性监测,评价重组溶葡球菌酶的疗效。实验结果显示,重组溶葡球菌酶可以减少肺炎小鼠体重、肺重的降低和脾重增加,促进动物体温和免疫细胞(WBC、GRAN、LYM、MONO)数量的恢复,并且减少小鼠死亡例数,延长死亡小鼠的生存时间、死亡中位时间,生存曲线右移,保护了动物在感染后期免于死亡。实验表明,重组溶葡球菌酶对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠肺炎的治疗效果优于临床常用抗生素万古霉素,在感染肺炎后4小时,给予高剂量的重组溶葡球菌酶的疗效最显著。
　　已有研究资料表明溶葡球菌酶对金葡菌具有良好的体内、外抗菌作用,有进一步开发成抗金葡菌感染用药的潜在价值。但是对于溶葡球菌酶治疗金黄色葡萄球菌感染的肺炎还鲜有报道。本实验对重组溶葡球菌酶治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染肺炎的效果进行了深入研究,找到了有效的治疗时间和药物剂量,为临床上进一步开发和应用溶葡萄球菌酶治疗耐甲氧西林金葡菌感染肺炎提供了实验基础。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

缩略词表

1. 嗜麦芽窄食单胞菌感染小鼠肺炎模型的建立

引言

材料与方法

结果

讨论

2. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染小鼠肺炎模型的建立

引言

材料与方法

结果

讨论

3. 重组溶葡球菌酶的表达及纯化

引言

材料与方法

结果

讨论

4. 重组溶葡球菌酶治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的小鼠肺炎的评价

引言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附录

个人简历

在学期间的研究成果

致谢