葡萄籽原花青素对DOCA-高盐诱导高血压大鼠心血管重构的保护作用及其可能机制

摘要

目的:心血管重构是高血压最重要的靶器官损害。本文通过复制醋酸去氧皮质酮(DOCA)-高盐高血压大鼠模型,观察葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)对DOCA-高盐高血压大鼠的血压、心血管损害的影响及其可能的作用机制。
　　方法:54只♂SD大鼠,体重180-200g,随机分为7组,包括Sham组(n=7)、UnX-Sham组(n=8)、DOCA-salt组(n=8)、GSP150 mg/kg组(GSP150,n=7)、GSP240 mg/kg组(GSP240,n=8)、GSP384 mg/kg(GSP384,n=8)组和氨氯地平5 mg/kg组(ALM,n=8)。除Sham组外,其余大鼠均摘除左侧肾脏,3d后皮下注射DOCA120 mg/kg,每周一次,同时饮用含1％ NaCl和0.2% KCl的高盐水,持续4wk,复制DOCA-高盐高血压大鼠模型。同时各治疗组大鼠分别给予不同剂量GSP或ALM灌胃,每天1次,持续4wk;Sham组、UnX-Sham组和DOCA-salt组的大鼠给予蒸馏水灌胃。每周通过ALC-NIBP无创血压测量分析系统测量大鼠尾动脉压。4 wk后,采用BL420S生物机能实验系统观察大鼠血流动力学和心脏功能的变化,计算心重指数。离体血管环实验检测血管内皮依赖性舒张功能。HE染色观察心脏和血管的病理学改变,VG染色观察心脏纤维化程度。用比色法检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和放免法(RIA)测定血清中脑钠肽(BNP)和内皮素-1(ET-1)含量。碱水解法测定心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量。Western-blot法检测心肌组织中JNK和p38MAPK蛋白表达及其磷酸化水平。
　　结果:Sham组与UnX-Sham组各项差别均无统计学意义。DOCA-salt组大鼠造模1wk后血压升高到168.53±4.21 mmHg(P﹤0.01 vs Sham组),4wk后血压升高到195.35±13.58 mmHg(P﹤0.01 vs Sham组)。给予GSP或ALM治疗后,大鼠血压均明显下降(P﹤0.01 vs DOCA-salt组)。
　　与Sham组比较,DOCA-salt组高血压大鼠心功能参数左心室收缩压(LVSP)和左心室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)明显降低(P﹤0.01),左心室舒张末压(LVEDP)明显升高(P﹤0.01),且心重指数明显增加(P﹤0.01)。HE和VG染色结果显示心肌细胞横截面积(CSA)、心肌组织中胶原容积分数(CVF)和血管周胶原容积分数(PVCA)明显增加(P﹤0.01)。GSP150、240、384mg/kg和ALM5mg/kg持续4 wk的治疗不仅抑制了LVSP和±dp/dtmax的降低,LVEDP的升高(P﹤0.05 vs DOCA-salt group),而且剂量依赖性的降低心重指数(P<0.05 vs DOCA-salt组),改善心脏形态学的变化。
　　与Sham组大鼠比较,DOCA-salt组大鼠血清中SOD活性和NO含量明显下降,MDA含量明显升高(P<0.01)。其胸主动脉对ACh诱导的血管舒张作用明显减弱。同时血管总面积(TAA)、血管内腔面积(LA)、血管横截面积(CSA)、CSA/TAA、血管外半径(AR)、血管中膜厚度(MT)和MT/LR值均明显增大(P﹤0.05,P﹤0.01 vs Sham group)。与DOCA-salt组比较,GSP和ALM治疗可明显抑制血管重构,改善内皮依赖性血管舒张功能,并剂量依赖性的抑制血清中SOD活性的降低和MDA含量的升高(P﹤0.01)。其中GSP240、384mg/kg和ALM组的大鼠血清中 NO含量分别增加到12.30±1.92,14.92±3.91和13.53±5.11μmol/L(P﹤0.05,P﹤0.01 vs DOCA-salt组)。
　　与Sham组大鼠比较,DOCA-salt组大鼠血清中ET-1和BNP含量显著升高(P﹤0.01),心肌组织中 Hyp含量也明显增加(P﹤0.01)。心肌组织中的JNK和p38MAPK磷酸化水平明显增加(P﹤0.05)。与DOCA-salt组比较,GSP384mg/kg可明显抑制 ET-1和BNP含量的升高(P﹤0.05),剂量依赖性的降低心肌组织中Hyp的含量(P﹤0.05,P﹤0.01),降低心肌组织中JNK和p38MAPK磷酸化水平(P﹤0.05)。
　　结论:GSP对DOCA-高盐诱导的高血压具有降压作用,且GSP能改善DOCA-高盐诱导的心血管重构,其机制可能与干预 ET-1—ROS—p38MAPK/JNK1/2通路有关。

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1.前言

2. 材料与方法

2.1. 材料

2.2. 实验方法

2.3. 统计学方法

3. 实验结果

3.1. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠血压的影响

3.2. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠颈动脉压的影响

3.3. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠心功能的影响

3.4. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠心重指数（HW/BW）的影响

3.5. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠心肌细胞横截面积（CSA）和纵径的影响

3.6. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠心肌胶原容积分数（CVF）和血管周胶原容积分数（PVCA）的影响

3.8. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响

3.9. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠胸主动脉重构的影响

3.10. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠血清中内皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）含量的影响

3.11. GSP对DOCA-盐高血压大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响

3.12.GSP对DOCA-盐高血压大鼠心肌组织中p38MAPK和JNK1/2的磷酸化水平的影响

4. 讨论

4.1. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠血压的影响

4.2. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠心肌重构的影响

4.3. GSP对DOCA-高盐高血压大鼠血管重构的影响

5.结论

参考文献

附录

致谢

综述