PBMSCs凝胶对兔肌腱移植物重建ACL腱骨愈合的影响

摘要

目的：探讨在兔自体肌腱移植物重建前交叉韧带（anterior cruciate ligament，ACL）模型股骨道内注入自体外周血间充质干细胞（peripheral blood mesenchymal stem cells，PBMSCs）凝胶对早期腱骨愈合的影响。
　　方法：健康3至4月龄新西兰大白兔32只，随机分为实验组与对照组，每组16只，实验组予以皮下注射粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员6天后于耳缘静脉采集外周血，密度梯度离心法分离纯化 PBMSCs，细胞培养箱内采用贴壁培养法培养并传代至第三代，光镜下观察细胞形态后行流式细胞检测鉴定所培养细胞表面特定抗原（CD11b、CD29、CD34、CD90）的表达。对全部32只新西兰大白兔采用抛硬币法随机选取一侧膝关节，建立兔自体肌腱移植物重建前交叉韧带模型，实验组于动物模型股骨道内注入PBMSCs凝胶，对照组仅注入凝胶。分别于术后第2、4、8、12周每组随机取4只实验动物处死取出膝关节，其中1只做Masson三色染色观察移植物在股骨道中组织愈合的病理表现，3只做股骨道移植物抗牵拉试验观察其愈合强度，记录移植物从骨道内脱出时的拉力值，实验组与对照组所得数据采用两样本t检验，比较两组数值有无显著性差异（选取?＝0.01为检验水准）。
　　结果：光镜下观察待测细胞以集落方式贴壁生长，呈长梭型或多角形。流式细胞学检测得出被检测细胞表面CD29、CD90、CD11b、CD34阳性表达率分别为97.3％、98.4%、1.3%、1.3%，提示被检测细胞表面表达CD29、CD90，不表达CD11b、CD34。Masson三色染色结果提示：术后第2周：两组在腱骨交界处均有大量坏死组织形成，纤维排列紊乱，成纤维细胞与胶原纤维均无明显增生；术后第4周：对照组仍有大量坏死组织，纤维排列不齐，有少量成纤维细胞增生，但未见明显胶原纤维。PBMSCs组坏死组织较空白组减少，组织排列欠规则，有少量成纤维细胞及胶原纤维长入；术后第8周：对照组有大量成纤维细胞长入，纤维排列欠规则，腱骨愈合界面有少量胶原纤维长入。PBMSCs组有大量成纤维细胞长入，部分纤维排列整齐，部分欠规则，腱骨愈合界面有大量胶原纤维长入；术后第12周：对照组成纤维细胞数量减少，胶原纤维生成增多，腱骨愈合交界处成纤维细胞与胶原纤维数量比约为1:1。PBMSCs组仅残余少量成纤维细胞，大量胶原纤维规则排列在腱骨愈合交界处。在实验组与对照组中，股骨道移植物抗牵拉力强度均随时间延长呈上升趋势，在术后第2周、第4周，对两组的抗牵拉强度进行比较，无明显统计学意义（P＞0.01）。在术后第8周及第12周，对两组的抗牵拉强度进行比较，PBMSCs组抗牵拉力强度大于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）
　　结论：PBMSCs凝胶对兔自体肌腱移植物重建ACL的早期腱骨愈合有促进作用。

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1.引言

2．材料与方法

2.1 实验动物与分组

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.5统计学分析

3 结果

3.1 PBMSCs的光镜观察

3.2 PBMSCs表面标记物的表达

3.3标本大体观察

3.4 Masson三色染色观察

3.5 股骨道移植物抗牵拉强度

4．讨论

5．结论

6．展望

参考文献

附录

致谢

综述: 干细胞治疗在前交叉韧带损伤中的应用