慢性乙肝患者外周血单个核细胞体外对干扰素及拉米夫定抗病毒应答的研究

摘要

目的：
　　探究α干扰素及拉米夫定对乙型肝炎患者外周单个核细胞JAK-STAT信号转导途径分子及抗病毒蛋白表达的影响。
　　方法：
　　从安徽医科大学第二附属医院肝病科门诊选取60名未治疗的乙肝患者以及66名健康志愿者，以Ficoll密度梯度离心法分离外周血中PBMCs，培养并按空白对照组、IFN-α处理组、3-TC处理组及IFN-α+3-TC联合处理组进行分组，分别以IFN-α和3-TC处理刺激各组细胞。以RT-qPCR和Western Blot技术分析JAK-STAT信号途径分子及抗病毒蛋白（STAT1、STAT2、IRF9、MxA）的表达并观察PBMCs对IFN-α和3-TC的应答反应，以探究 HBV对PBMCs IFN-αJAK-STAT信号转导途径的影响。
　　结果：
　　乙肝患者PBMCs在IFN-α处理组及联合处理组STAT1、STAT2、IRF9等相关信号转导分子及抗病毒蛋白 MxA的表达显著增高（P<0.05）；在拉米夫定处理组，细胞信号转导分子IRF9及抗病毒蛋白MxA的表达显著增高（P<0.05）；与健康对照组相比，乙肝患者PBMCs的空白组、IFN-α处理组和联合处理组的JAK-STAT信号转导途径分子（STAT1、STAT2、IRF9）及抗病毒蛋白MxA的表达明显降低（P<0.05）。
　　结论：
　　（1）在乙型肝炎患者体内，HBV可能通过作用于PBMCs JAK-STAT信号转导途径，抑制抗病毒蛋白 MxA表达，进而拮抗IFN-α抗病毒效应。
　　（2）3-TC与IFN-α联合作用能显著增强乙肝患者PBMCs细胞内JAK-STAT途径分子表达，提高抗病毒蛋白MxA的表达，进而增强IFN-α抗病毒效应。

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1前言

2 材料和方法

2.1实验仪器

2.2 实验试剂

2.3 试剂的配制

2.4实验方法

2.5 实验分组

2.6 统计分析

3 结果

3.1 细胞总RNA完整性检测

3.2 RT-PCR 分析健康志愿者 PBMCs JAK-STAT 信号转导途径分子（STAT1、STAT2、IRF9）及抗病毒蛋白MxA的表达

3.3 RT-PCR分析乙肝患者PBMCs JAK-STAT信号转导途径分子（STAT1、STAT2、IRF9）及抗病毒蛋白MxA的表达

3.4 RT-qPCR 分析健康志愿者、乙肝患者 PBMCs JAK-STAT 信号转导途径分子（STAT1、STAT2、IRF9）及抗病毒蛋白MxA的表达

3.5 Western blot分析乙肝患者PBMCs不同处理组的JAK-STAT 信号转导途径分子（STAT1、STAT2、IRF9）及抗病毒蛋白MxA的表达

3.6 Western blot分析健康志愿者、乙肝患者PBMCs不同处理组的JAK-STAT 信号转导途径分子（STAT1、STAT2、IRF9）及抗病毒蛋白MxA的表达

4 讨论

5 结 论

参考文献

附录

致谢

综述: 趋化因子在HBV/HCV病毒介导的肝脏疾病中的作用