8-异丙胺亚甲基橙皮素(IPHP)在大鼠体内的药代动力学研究和体外跨膜转运机制的初探

摘要

橙皮素（hesperetin）为芸香科柑橘属植物果实提取物，是广泛存在于柚子和橙子中二氢黄酮类化合物，具有广泛的药理学特性，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤等活性。橙皮素口服以后生物利用度较好，但是半衰期较短，口服给药以后体内消除较快，为了维持有效血药浓度，需要频繁给药，这一缺点限制了其在临床上的应用。为了克服这一缺点，本课题组通过化学合成的方法，合成了一系列的橙皮素衍生物并对其药理活性进行了筛选。本课题组前期研究发现7,3′-二甲氧基橙皮素(7,3′-dimethoxy hesperetin，DMHP)具有较强抗炎活性,对A A大鼠继发性炎症具有良好的治疗作用。前期研究还发现8-异丙胺亚甲基橙皮素(IPHP)，在体外具有良好的抗炎活性，对于由LPS刺激RAW264.7细胞产生的TNF-α和IL-6具有明显的抑制作用。该实验的目的是建立IPHP在大鼠体内的药动学研究方法，对其进行早期药动学研究，同时利用MDCK细胞模型来模拟小肠上皮细胞对IPHP的吸收情况，通过对MDCK细胞膜上转运蛋白，如P糖蛋白（P-gp）、多药耐药蛋白（MRP2）的研究来探讨其吸收及外排机制，为以后的药理学研究提供依据，为将来的临床前研究提供思路。本实验的主要内容包括以下几个方面：
　　1.IPHP在大鼠体内的药动学研究
　　40只SD大鼠随机分为：橙皮素组（100mg/kg），IPHP低，中，高剂量组（25,50，100mg/kg）和IPHP静脉注射组（25mg/kg），每组8只。灌胃，静脉给药后不同时间点大鼠眼底静脉丛取血，用本实验建立的 HPLC法测定血浆中的橙皮素和IPHP的浓度，根据所得的血浆药物浓度-时间曲线，计算药物代谢动力学参数，分别计算IPHP在低中高3个不同浓度的Tmax(h)：2.3±0.67、2.40±0.55、2.10±0.55；t1/2(h)：6.37±1.91、6.45±1.93、6.61±1.98；Cmax(μg/ml)：1.15±0.32、2.60±0.70、4.36±1.18；AUC(mg/L·h)：9.34±1.68、22.98±4.14、41.63±7.49。橙皮素的Tmax(h)为0.35±0.11，t1/2(h)：3.07±1.12；Cmax(ug/ml)：4.56±1.09，AUC(mg/L·h)：50.23±12.22。与等剂量组的橙皮素相比，IPHP的半衰期明显延长，血药浓度液维持在较高的水平，达峰时间延迟，相对生物利用度提高了。
　　2. IPHP在MDCK单层细胞模型上的吸收转运实验的研究
　　MTT法筛选出安全的适合跨细胞膜转运的药物浓度（120μΜ以内），药物跨膜转运的实验分组：7.5,15,30,60,120μΜ五个药物浓度组以及温度，pH，转运蛋白抑制剂组。探讨药物浓度、pH、温度、P-gp抑制剂维拉帕米、MRP2抑制剂MK-571和丙磺舒对IPHP在体外细胞模型上跨膜转运的影响。实验取的样品通过上述建立的HPLC法测定血浆中的药物的浓度，根据所得的血浆药物浓度-时间曲线，计算药物浓度，根据公式Papp=(dQ/dt)/A×C0和ER=Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)计算不同浓度药物的Papp(AP-BL)(×10–5)(cm·s-1)：1.49±1.20、2.81±1.20、3.28±0.45、3.45±1.30、3.47±1.27。Papp(BL-AP)(×10–5)(cm·s-1):2.12±0.728、3.87±0.364、4.27±1.16、4.08±2.68、4.15±3.66。外排率分别为：1.41、1.37、1.3、1.18、1.19。温度和pH对其转运均有影响，而P-gp抑制剂对于IPHP的转运没有明显的影响，MRP2抑制剂在一定程度上增加了IPHP的转运量。IPHP在MDCK细胞模型上的转运方式主要是被动扩散，且其转运不受P-gp外排蛋白影响，而外排蛋白MRP2可能参与了IPHP的外排转运。

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第一部分 8-异丙胺亚甲基橙皮素(IPHP)在大鼠体内的药代动力学研究

1.前言

2. 实验材料

3. 实验方法

4. 实验结果

5讨论

6.小结

第二部分 IPHP在MDCK细胞模型上跨膜转运机制的研究

1.前言

2. 实验材料

3. 实验方法

4. 实验结果

5 讨论

6 小结

参考文献

附录

致谢

综述: 肠吸收体外细胞模型及其在药物透过研究中的应用进展