PBA抑制博莱霉素诱导肺纤维化过程中的上皮-间质转化

摘要

目的：
　　为了研究PBA对于博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化及肺纤维化发生过程中肺泡上皮细胞上皮-间叶转化的影响；
　　方法：
　　取成年ICR雄性小鼠（28-32g）。随机分为四组：空白对照组（Control），单纯PBA对照组（PBA），肺纤维化模型组（BLM），PBA保护组（BLM+PBA）。在肺纤维化模型组中，一次性给予小鼠气管内注射博莱霉素（3.0mg/kg）。在PBA保护组中，同时给予小鼠每天腹腔注射PBA（150mg/kg），给予小鼠博莱霉素21天后处死小鼠，取出肺组织。留取部分肺组织福尔马林固定，石蜡包埋后切片HE染色了解各组小鼠肺组织中炎症浸润情况，天狼星红染色了解各组肺组织纤维化情况，同时留取切片用于免疫组织化学检测了解α-SMA及NF-κb在各组小鼠肺组织中的表达。提取肺组织总蛋白用于测定内质网应激通路相关蛋白GRP78、CHOP、p-eIF2α、eIF2α、IRE1α、p-IRE1α及EMT特异性分子α-SMA等在肺组织中的表达。提取肺组织RNA，利用RT-PCR测定TNF-α、IL-1β、IFN-γ和TGF-β1等炎性因子及胶原基因Col1α1和Col1α2在各组小鼠肺中的表达。
　　结果：
　　在肺纤维化模型组中，给予小鼠气管内注入博莱霉素21天后，蛋白印迹试验证实纤维化模型组小鼠肺组织中内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、p-eIF2α、p-IRE1α表达较正常对照小鼠明显升高，而给予PBA后可以明显抑制小鼠肺组织中内质网应激相关蛋白的水平的升高；HE染色证明肺纤维化模型组小鼠肺组织中炎症浸润明显，给予PBA后可以抑制小鼠肺组织中炎症浸润程度；免疫组化提示纤维化模型组小鼠中NF-κb阳性细胞明显增多，而给予PBA后可以明显减少NF-κb阳性细胞的数量；RT-PCR结果提示肺纤维化模型组小鼠肺组织中TNF-α、IL-1β、IFN-γ和TGF-β1基因表达水平明显升高，给予PBA后可以明显抑制这些炎性因子基因的表达；免疫组化及蛋白印迹实验证实肺纤维化模型组小鼠肺组织中α-SMA表达明显升高，PBA可以明显抑制α-SMA在小鼠肺组织中的表达；天狼星红染色提示给予小鼠气管内注射博莱霉素21天后可见肺组织中胶原蛋白明显增多，PBA可以减轻博莱霉素所致的肺纤维化程度；同时RT-PCR提示肺纤维化模型组中胶原基因Col1α1和Col1α2表达水平明显升高，而PBA可以抑制Col1α1和Col1α2表达的升高。
　　结论：
　　PBA可能抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中的内质网应激介导的上皮-间质转化。

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英文缩略词表(Abbreviation)

中文摘要

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1.引言

2.材料和方法

2.1化学试剂

2.2动物处理

2.3肺组织病理学

2.4总蛋白的提取

2.5蛋白质印迹技术(Western blotting)

2.6肺组织免疫组织化学检测

2.7实时定量逆转录-聚合酶链反应

2.8统计分析

3.结果：

3.1 PBA抑制博莱霉素诱导的肺中内质网应激

3.2 PBA可以减轻博莱霉素诱导的肺组织损伤

3.3 PBA可以抑制博莱霉素诱导的肺中NF-κb的活化

3.4 PBA可以抑制博莱霉素诱导的肺中炎性因子的上调

3.5 PBA可以抑制博莱霉素诱导的肺组织中的EMT

3.6 PBA减轻博莱霉素诱导的肺纤维化

4.讨论

5.结论

参考文献

附录

致谢

综述 : 特发性肺纤维化发病机制的进展