抗中间普氏菌卵黄抗体的制备及其对实验性妊娠期龈炎的预防作用

摘要

目的：制备并纯化抗中间普氏菌卵黄抗体（抗P.intermedia-IgY），观察其对大鼠实验性妊娠期龈炎的预防作用。
　　方法：厌氧培养P.intermedia菌，2%甲醛灭活，以终浓度为1 x109 CFU/mL的P.intermedia菌，1 mL（0.5 mL菌液+0.5 mL佐剂）/次，免疫蛋鸡4次。用卵黄分离器去除蛋清，无菌注射器刺破卵黄膜，收集卵黄液，两步硫铵沉淀法纯化抗P.intermedia-IgY。SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot、ELISA对其分子量及特异性鉴定，并检测免疫后效价变化。将30只雌性SD大鼠（8-10周龄），15只雄性SD大鼠（8-10周龄），雌:雄=2:1合笼获得24只孕鼠，随机分为4组:0.12%氯己定孵育组（A），抗P.intermedia-IgY孵育组（B），生理盐水孵育组（C），空白组（D）。在造模期间，按分组情况接种经不同处理液孵育后的P.intermedia，1次/天，总共7次。通过检测各组之间牙龈指数（GI）、牙菌斑中P.intermedia含量差异及牙龈组织病理学检查，观察抗P.intermedia-IgY对实验性妊娠期龈炎的抑制作用。
　　结果：经4次免疫后抗体最高效价为1:512,000，维持45 d。1 g卵黄经两步硫铵沉淀后得IgY约18 mg。SDS-PAGE凝胶电泳显示纯化后IgY纯度达64.5%。Western blot显示抗P.intermedia-IgY识别并特异性结合P.intermedia菌裂解片段。动物实验观察见0.12%氯己定孵育组及抗P.intermedia-IgY孵育组牙龈指数（gingival index，GI）显著低于生理盐水孵育组（P＜0.01），而两者之间GI无统计学差异（P＞0.05）。牙龈组织病理学观察显示抗P.intermedia-IgY孵育组牙龈的炎症状态轻于生理盐水孵育组。
　　结论：经4次免疫后可得到持续高效价的抗P.intermedia-IgY，且抗P.intermedia-IgY能够减轻大鼠实验性妊娠期龈炎的炎症状态，对大鼠实验性妊娠期龈炎有一定的预防作用。

目录

声明

中英文缩略词表

1引言

2 材料与方法

2.1主要材料与设备

2.2主要试剂配制

2.3中间普氏菌的培养、鉴定和保存

2.4 蛋鸡免疫

2.5 特异性IgY的纯化和鉴定

2.6动物实验

3实验结果

3.1 P.intermedia菌的培养鉴定

3.2 Lowrry法测IgY浓度

3.3 SDS-PAGE凝胶电泳

3.4 Western blot检测结果

3.5 ELISA法测定特异性IgY的效价变化

3.6 动物实验结果

4讨论

4.1卵黄抗体的发展

4.2 P.intermedia与牙周疾病

4.3 P.intermedia与系统性疾病

5 结论

参考文献

附录

个人简历

发表论文情况

参与课题

致谢

综述:中间普氏菌在牙周病中的致病机制