声明
第一章 绪论
1.1 酶的概述及分类
1.2 DNA 修复酶
1.2.1 DNA 糖基化酶
1.2.2 端粒酶
1.3 酶的检测方法
1.3.1 比色分析法
1.3.2 拉曼分析法
1.3.3 发光分析法
1.3.4 电化学分析法
1.3.5 荧光分析法
1.3.6 单分子检测法
1.4 本论文的研究意义及研究内容
第二章 三重信号放大的生物传感器在单细胞水平检测端粒酶
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 试剂和仪器
2.2.2 细胞培养及端粒酶提取物的制备
2.2.3 端粒酶活性的荧光检测
2.2.4 凝胶电泳实验
2.2.5 抑制剂筛选
2.3 结果与讨论
2.3.1 三重信号放大策略应用于检测单细胞中端粒酶活性的原理
2.3.2 方案的可行性验证
2.3.3 优化反应条件
2.3.4 灵敏度分析
2.3.5 选择性分析
2.3.6 实际样品分析
2.3.7 抑制剂筛选
2.4 结论
第三章 基于单个量子点的纳米传感器超灵敏检测人烷基腺嘌呤DNA糖基化酶
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 试剂和材料
3.2.2 发卡探针的制备
3.2.3 酶反应与 QD-dsDNA-Cy5 纳米结构的制备
3.2.4 凝胶电泳和荧光测定
3.2.5 熔解曲线分析
3.2.6 单分子检测和数据分析
3.2.7 抑制剂筛选
3.2.8 细胞培养和制备细胞提取物
3.3 结果与讨论
3.3.1 基于单个 QD 的多层多受体纳米传感器用于 hAAG 活性测定的原理
3.3.2 方案的可行性验证
3.3.3 优化实验条件
3.3.4 计算单量子点纳米传感器的 FRET 效率
3.3.5单分子成像测量hAAG活性
3.3.6 灵敏度分析
3.3.7 选择性分析
3.3.8 动力学分析
3.3.9 抑制剂筛选
3.3.10 细胞中 hAAG 的活性分析
3.4 结论
第四章 基于磁珠分离的单分子检测法同时检测多种 DNA糖基化酶
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 试剂和材料
4.2.2 DNA 储备溶液的制备
4.2.3 信号探针与链霉亲和素包被的磁珠的连接
4.2.4 在单分子水平上检测 hOGG1 和 UDG
4.2.5 凝胶电泳分析
4.2.6 荧光光谱测量
4.2.7 抑制剂实验
4.2.8 细胞培养和细胞提取物的制备
4.3 结果与讨论
4.3.1 单分子同时检测 hOGG1 和 UDG 的原理
4.3.2 方案的可行性验证
4.3.3 优化实验条件
4.3.4 单分子同时检测 hOGG1 和 UDG
4.3.5 特异性分析
4.3.6 动力学分析
4.3.7 抑制剂筛选
4.3.8 同时检测癌细胞中的 hOGG1 和 UDG
4.4 结论
第五章 滚环扩增编码的多种荧光分子在单分子水平同时检测多种DNA修复酶
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 试剂和材料
5.2.2 双功能 dsDNA 底物的制备
5.2.3 DNA 糖基化酶引发的碱基切除反应和 RCA 反应
5.2.4 扩增产物与链霉亲和素包被的磁珠的连接
5.2.5 核酸外切酶消化反应和荧光测量
5.2.6 单分子检测和数据分析
5.2.7 凝胶电泳分析
5.2.8 抑制剂筛选
5.2.9 细胞培养和细胞提取物的制备
5.3 结果与讨论
5.3.1 单分子同时检测 hAAG 和 UDG 的原理
5.3.2 方案的可行性验证
5.3.3 优化实验条件
5.3.4传统荧光法的检测灵敏度
5.3.5 单分子水平同时检测多种 DNA 糖基化酶
5.3.6 特异性分析
5.3.7 动力学分析
5.3.8 抑制剂筛选
5.3.9 细胞中 DNA 糖基化酶的检测
5.4 结论
第六章 总结
参考文献
攻读博士学位期间的科研成果
致谢
山东师范大学;
