声明
缩 略 词 说 明
1 前言
1.1叶片衰老
1.1.1叶片衰老的类型
1.1.2叶片衰老的起始
1.1.3影响植物衰老的内在因素
1.1.4影响植物衰老的外在因素
1.1.5叶片衰老的基因调控
1.1.6衰老对作物产量及品质的影响
1.2 FHY3/FAR1转录因子
1.2.1 FHY3/FAR1的发现
1.2.2 FHY3/FAR1 的起源
1.2.3 FHY3/FAR1 的结构特征
1.2.4 FHY3/FAR1 结合并调控下游基因
1.2.5 FHY3/FAR1 对拟南芥生长发育的调控
1.3本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1实验材料
2.1.1植物材料与生长条件
2.1.2载体与菌株
2.1.3 抗体、酶及其它生化试剂
2.1.4实验引物
2.2实验方法
2.2.1种子消毒
2.2.2 GM培养基配制
2.2.3叶绿素含量测定
2.2.4 RNA的提取及反转录
2.2.5植物基因组DNA提取
2.2.6 SDS-PAGE凝胶电泳分离DNA片段
2.2.7目的片段扩增与载体构建
2.2.8大肠杆菌DH5α感受态的制备及转化
2.2.9农杆菌GV3101感受态制备与转化
2.2.10拟南芥基因转化及鉴定
2.2.11蛋白质免疫印迹
2.2.12染色质免疫共沉淀
2.2.13酵母感受态的制备及转化
2.2.14 β-半乳糖苷酶的活性测定（ONPG法）
2.2.15拟南芥原生质体瞬时转化实验
2.3数据处理与统计分析
3 结果与分析
3.1 FHY3/FAR1负调控拟南芥叶片衰老
3.1.1 FHY3负调控年龄诱导的叶片衰老
3.1.2 FHY3负调控光介导的叶片衰老
3.1.3 FHY3参与了乙烯、茉莉酸及水杨酸调控的叶片衰老
3.2 FHY3调控多个衰老相关的转录因子
3.2.1叶片衰老转录组、fhy3 far1 转录组、FHY3 ChIP-seq数据分析
3.2.2 FHY3对下游衰老相关基因的表达调控分析
3.3 FHY3靶向结合WRKY28启动子并负调控其基因表达
3.3.1 WRKY28 启动子分析
3.3.2酵母单杂交实验验证FHY3与WRKY28启动子FBS元件的结合
3.3.3染色质免疫共沉淀实验验证FHY3与WRKY28启动子的结合
3.3.4原生质体瞬时转化实验检测FHY3/FAR1对WRKY28基因的负调控
3.3.5 qRT-PCR 实验验证FHY3对WRKY28 基因的负调控作用
3.4 FHY3间接调控衰老正调控转录因子WRKY75的基因表达
3.4.1原生质体瞬时转化实验验证FHY3/FAR1对WRKY75基因的负调控
3.4.2 qRT-PCR 实验检测FHY3对WRKY75 基因的调控
3.5 WRKY28正调控拟南芥叶片衰老
3.5.1 WRKY28 过量表达促进拟南芥叶片衰老
3.5.2 WRKY28 基因突变导致拟南芥叶片衰老延迟
3.6 WRKY28基因突变恢复fhy3-4早衰表型
3.6.1利用CRISPR-Cas9 技术获得fhy3-4 wrky28 突变体株系
3.6.2 fhy3-4 wrky28 突变体株系的叶片衰老表型分析
3.7 FHY3及WRKY28通过控制拟南芥SA合成及积累调控叶片衰老
3.7.1原生质体瞬时转化验证FHY3/FAR1、WRKY28对ICS1/SID2的基因表达调控
3.7.2 ICS1/SID2基因突变恢复fhy3-4的早衰表型
3.7.3过量表达S3H基因恢复fhy3-4的早衰表型
3.7.4 WRKY28 基因突变恢复fhy3-4对SA的超敏反应诱导的衰老
3.8 FHY3-WRKY28调控元件参与了光介导的叶片衰老调控
3.9 FHY3-WRKY28整合年龄及光信号调控叶片衰老
3.9.1 FHY3 及WRKY28 的转录水平受年龄调控
3.9.2 FHY3的蛋白水平受年龄调控
3.9.3 FHY3-WRKY28 调控模式存在于幼苗期
3.9.4 FHY3-WRKY28 主要介导了高比率R/FR 抑制的叶片衰老
3.10 FHY3参与了EIN3及PIF4调控的叶片衰老
3.10.1 FHY3通过EIN3 调控了年龄介导的叶片衰老进程
3.10.2 FHY3通过PIF4 调控了拟南芥叶片衰老
4 讨论
4.1 FHY3/FAR1负调控拟南芥叶片衰老
4.2 FHY3/FAR1调控叶片衰老的途径分析
4.3 FHY3-WRKY28调控了年龄及光介导的叶片衰老
4.3.1 FHY3对下游衰老相关基因的抑制作用
4.3.2 FHY3通过WRKY28 调控叶片衰老
4.4光敏色素在FHY3/FAR1调控的叶片衰老中的作用
5 结论
参 考 文 献
致 谢
攻读学位期间发表的论文及成果
山东农业大学;
