VMH脑区ghrelin/GHS-R1a信号对焦虑相关行为的调控作用及机制探讨

目录

引言

材料与方法

1.实验动物

2.小鼠基因鉴定

2.1 试剂

2.2 仪器

2.3 引物序列

2.4 溶液配制

2.5 实验步骤

3 免疫荧光

3.1 试剂

3.2 溶液配制

3.3 实验仪器

3.4 实验步骤

4 实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（qRT-PCR）

4.1提取总RNA

4.2 mRNA 反转录为 cDNA

4.3实时荧光定量PCR（Real time PCR）

5 小鼠脑区病毒定位注射

5.1 试剂

5.2 实验仪器

5.3 实验步骤

6 行为学测试

6.1高架十字迷宫（Elevated plus maze）

6.2社交实验（Social interaction）

6.3悬尾实验（Tail suspension test）

6.4 强迫游泳（Forced swim）

7反复禁锢模型（Repeated restraint stress）

8 统计处理

实验结果

１．病毒介导的 Ghsr1a 过表达对焦虑相关行为的影响

1.1 病毒介导的 VMH 脑区 αCaMKII+ 神经元Ghsr1a 过表达

1.2 VMH 脑区 αCaMKII+ 神经元过表达 Ghsr1a 加重基础状态下小鼠的焦虑样行为

1.3 VMH脑区αCaMKII+神经元过表达Ghsr1a加重反复禁锢应激小鼠的焦虑样行为障碍

1.4 病毒介导的 VMH 脑区抑制性神经元 Ghsr1a 的过表达

1.5 VMH 脑区抑制性神经元过表达 Ghsr1a 加重基础状态下小鼠的绝望样行为

1.6 VMH 脑区抑制性神经元过表达 Ghsr1a 加重反复禁锢应激小鼠的绝望样行为

2 AAV病毒介导的Ghsr1a干扰实验

2.1干扰 VMH 脑区 Ghsr1a 的表达缓解基础状态下小鼠的焦虑相关行为障碍

2.2干扰 VMH 脑区 Ghsr1a 的表达缓解反复禁锢应激小鼠的焦虑相关行为障碍

2.3 免疫荧光确定病毒的表达位置， qRT-PCR 检测 Ghsr1a 的干扰率

3 利用化学遗传学方法探究激活 VMH 区 αCaMKII+ 神经元对焦虑相关行为的调控作用

3.1 CNO 激活 VMH 脑区 αCaMKII+ 神经元缓解小鼠的焦虑相关行为

3.2 CNO 激活过表达 Ghsr1a 的 VMH 区αCaMKII+ 神经元不能缓解小鼠的焦虑相关行为

讨论

结论

参考文献

综述:焦虑及其神经机制研究

综述参考文献

攻读学位期间的研究成果

缩略词表

致谢

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