二氧化硅胁迫下肺纤维化相关生物学响应的初步研究

目录

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引言

第一章 综述

1.1 尘肺病

1.1.1 尘肺病概况

1.1.2 尘肺病的发病机制

1.1.3 尘肺病的治疗现状

1.2 可变剪接

1.2.1 可变剪接的定义

1.2.2 可变剪接的类型

1.2.3 可变剪接的调控机制

1.2.4 可变剪接的功能与意义

1.3 TGF-β 因子及其信号通路

1.3.1 TGF-β 因子概述

1.3.2 TGF-β与ECM沉积和EMT转化的关系

1.3.3 TGF-β 信号通路与Smads蛋白的关系

1.3.4 TGF-β—Smad3信号通路

1.4 研究目的及意义

第二章 尘肺病动物模型体内可变剪接事件的验证

2.1实验材料

2.1.1 动物材料

2.1.2 实验药品与试剂

2.1.3 实验试剂的配制

2.2 实验所需器材

2.2.1 实验仪器

2.2.2 实验分析软件

2.3 实验方法

2.3.1 SD 大鼠的处理

2.3.2 肺部组织切片染色

2.3.3 肺部组织Masson染色

2.3.4 肺部组织RNA提取及cDNA合成

2.3.5 引物设计

2.3.6 PCR方法检测基因跳跃外显子的保留率

2.4 实验结果分析

2.4.1 肺部组织HE染色结果

2.4.2 肺部组织Masson染色结果

2.4.3 RNA提取

2.4.4 动物体内可变剪接事件的实验验证

2.5 实验小结

2.6 讨论

第三章 二氧化硅胁迫下巨噬细胞的生物学相关响应

3.1 实验材料及仪器

3.1.1 细胞株系

3.1.2 实验药品与试剂

3.1.3 实验试剂的配制方法

3.1.4 试验仪器

3.2 实验方法

3.2.1 RAW264.7细胞复苏

3.2.2 RAW264.7细胞传代与冻存

3.2.3 单细胞凝胶电泳检测方法

3.2.4 细胞增殖（MTT）检测

3.2.5 SiO2胁迫下RAW264.7细胞外泌因子的检测

3.2.6 SiO2胁迫下巨噬细胞基因表达的检测

3.3 实验结果分析

3.3.1 SiO2胁迫下巨噬细胞DNA损伤鉴定

3.3.2 SiO2对巨噬细胞外泌因子的影响

3.3.3 SiO2对巨噬细胞基因表达的影响及最佳接种量的确定

3.3.4 LPS对巨噬细胞基因表达的影响

3.4 实验小结

3.5 讨论

第四章 二氧化硅胁迫下巨噬细胞与成纤维细胞的级联响应

4.1 实验材料

4.1.1 细胞材料

4.1.2 实验药品

4.2 实验方法

4.2.1 细胞复苏与传代培养

4.2.2 共培养体系的建立

4.2.3 Toal RNA的提取与及cDNA合成

4.2.4 引物设计

4.2.5 Real-time PCR方法检测基因表达量

4.3 实验结果分析

4.3.1 共培养体系的初次建立

4.3.2 SiO2胁迫浓度的优化

4.3.3 成纤维细胞密度对共培养体系的影响

4.4 实验小结

4.5 讨论

第五章 TGF-β因子刺激下成纤维细胞的生物学效应

5.1 实验材料

5.1.1 细胞材料

5.1.2 实验药品

5.1.3 试验药品配制

5.2 实验方法

5.2.1 细胞复苏与传代

5.2.2 TGF-β因子刺激成纤维细胞

5.2.3 细胞Toal RNA的提取及cDNA的合成

5.2.4 Real-time PCR方法检测基因表达水平变化

5.2.5 蛋白提取及浓度测定

5.2.6 蛋白质印迹法（Western Blot）

5.3 实验结果分析

5.3.1 培养液中FBS含量的确定

5.3.2 TGF因子对成纤维细胞基因表达水平的影响

5.3.3 TGF因子对成纤维细胞SMAD3蛋白磷酸化水平的影响

5.3.4 TGF因子浓度的确定

5.3.5 TGF对成纤维细胞影响作用的进一步确认

5.4 实验小结

5.5 讨论

参考文献

在学研究成果

致谢