99mTc-3PRGD2显像对类风湿性关节炎血管形成及血管形成拮抗剂的实验研究

摘要

目的：　　1、通过分子探针99mTc-3PRGD2在体观察大鼠类风湿性关节炎模型造模前后关节显像剂摄取的变化，与病理结果、免疫组化检测结果比较，证明99mTc-3PRGD2显像是在体评价RA的滑膜血管翳形成的特异性显像方法，为99mTc-3PRGD2显像在RA患者早期诊断的应用提供理论依据。　　2、通过分子探针99mTc-3PRGD2在体观察血管形成拮抗剂治疗类风湿性关节炎大鼠模型的显像剂摄取的变化，并与病理结果、免疫组化检测结果比较，证明99mTc-3PRGD2显像是筛选新的抗滑膜血管翳形成的靶向药物的显像方法，为99mTc-3PRGD2 SPECT显像在RA患者临床靶向药物筛选方面提供理论依据。　　方法：　　1、健康雌性Sprague-Dalway（SD）大鼠随机分为胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis,CIA）组、骨性关节炎(Osteoarthritis OA)组及空白对照组，利用牛Ⅱ型胶原乳剂免疫诱导的方法建立CIA组大鼠模型，木瓜蛋白酶加左旋半胱氨酸制作 OA模型。　　2、将前期实验造模成功的CAI组大鼠，随机分为重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR：Fc)治疗组、贝伐单抗(bevacizumab，商品名Avastin)治疗组及空白对照组（同期给予生理盐水）。　　3、在造模及治疗前后对实验大鼠均进行一般状态及局部关节肿胀度观察，测量体重（weight，WT）、关节炎指数（arthritis index，AI）评分，并利用感兴趣区ROI技术测量分析实验大鼠在造模及治疗前后四肢关节（T）与纵膈(NT)99Tcm-3PRGD2放射性计数比值（T/NT）的变化情况。　　4、实验大鼠在造模及治疗前后利用酶联免疫吸附试验(ELISA)同步检测血清VEGF、TNF-α及αvβ-3表达水平。　　5、造模成功后将CAI组部分大鼠、OA组全部大鼠，空白对照组全部大鼠及治疗后全部大鼠处死行后足远端趾间关节病理切片，苏木素．伊红(HE)染色并行关节炎病理损伤指数评分。免疫组织化学法同步检测实验大鼠造模及治疗前后滑膜组织中VEGF、TNF-α、αVβ3、CD31、CD34表达水平，并利用半定量积分法评价其染色结果。　　6、应用SPSS13．0统计软件进行统计分析，计量资料统计描述采用?±s表示，计数资料采用自然数和百分数表示。计量资料采用两独立样本t检验，等级资料采用秩和检验，配对计量资料比较采用配对样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，若方差齐性，组间多重比较采用LSD法，若方差不齐则采用近似方差分析Welch法,组间多重比较采用Dunnett’sT3法；相关性分析采用 Pearson、Sperman相关；检验水准α=0.05。　　结果：　　1、CIA组100（死亡6）只大鼠共58只造模成功，造模成功率约为62％。CAI组大鼠临床表现显著，病理评分损伤指数及滑膜组织中 VEGF、TNF-α、αVβ3、CD31、CD34表达水平与空白对照组及 OA组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。　　2、CIA组大鼠在注射造模药物后第30天血清中 VEGF、TNF-α、αVβ3水平分别为315.78±225.57pg/ml，370.61±172.21 pg/ml，26.425±12.397pg/ml，空白对照组及 OA组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。　　3、造模前CIA组与空白对照组及OA组大鼠关节部位T/NT值比较差异无统计学意义（P＞0.05）。15天时CIA组与空白对照组及OA组大鼠关节部位T/NT值比较差异有统计学意义（P＜0.05），30天时 CIA组与空白对照组及 OA大鼠关节部位 T/NT值比较差异有统计学意义（P＜0.05）。　　4、CAI组大鼠在注射造模药物后30天病变关节部位 T/NT值与关节炎指数积分、血清VEGF、TNF-α、αVβ3水平、病理评分损伤指数及滑膜组织中VEGF、TNF-α、αVβ3、CD31、CD34表达水平均呈正相关（r=0.562、0.721、0.521、0.391、0.606、0.408、0.561、0.594、0.669、0.365，P＜0.05）。　　5、CAI组大鼠经rhTNFR：Fc和贝伐单抗治疗后T／NT值均下降，治疗前分别为0.543±0.223，0.509±0.140，治疗后分别为0.262±0.868，0.223±0.529，差异均有统计学意义(P＜0.05)。随着rhTNFR：Fc和贝伐单抗治疗后，滑膜新生血管减少，关节炎指数积分和血清VEGF、TNF-α、αVβ3水平及滑膜组织中VEGF、TNF-α、αVβ3、CD31、CD34表达水平均随之下降，其T／NT值与上述指标均呈正相关(rhTNFR：Fc治疗组r=0.485，0.624,0.607,0.598，0.609，0.549，0.479,0.496,0.706，P＜0.05；贝伐单抗治疗组r=0.662，0.659,0.789,0.807，0.483，0.570，0.553,0.483,0.577，P＜0.05)　　结论：　　1、99mTc-3PRGD2靶向受体显像剂在RA大鼠模型病变关节部位摄取特异性高，与大鼠的血清指标、病理及免疫组化结果相一致，99mTc-3PRGD2靶向受体显像剂对RA早期滑膜新生血管形成显像有潜在的应用价值。　　2、99mTc-3PRGD2靶向受体显像剂在RA大鼠模型治疗前后病变关节部位摄取有明显变化，与大鼠的血清指标、病理及免疫组化结果相一致，99mTc-3PRGD2靶向受体显像在筛选新的抗滑膜血管翳形成的靶向药物具有临床应用价值。

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前言

第一部分：99mTc-3PRGD2显像对类风湿性关节炎血管形成的实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

第二部分：99mTc-3PRGD2 显像对类风湿性关节炎筛选血管形成拮抗剂的实验研究

1 材料与方法

2 结 果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述: 生物制剂治疗类风湿关节炎的研究进展

主要英文缩略词

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