全文专业词汇的英文缩写及中文对照
第1章 绪论
1.1 serpin基本特征
1.1.1 serpin基因及其超家族分类
1.1.2 serpin的结构特征及其作用机制
1.2 serpin蛋白调节补体系统
1.2.1 补体系统
1.2.2 serpin抑制C1复合物的形成
1.2.3 C1复合物的功能
1.3 本文研究意义
第2章 七鳃鳗L-serpin基因分子克隆和生物信息学分析
2.1 材料
2.1.1 动物材料
2.1.2 药品及试剂
2.1.3 主要仪器
2.2方法
2.2.1 引物设计
2.2.2 PCR扩增
2.2.3 L-serpin目的片段回收
2.2.4 L-serpin目的片段与T载体连接并测序
2.2.5 生物信息学分析
2.3 结果
2.3.1 L-serpin基因的分子克隆
2.3.2 L-serpin生物信息学分析
2.4 讨论
第3章 L-serpin原核重组质粒构建和蛋白表达纯化及多抗制备
3.1 材料
3.1.1 动物材料
3.1.2 质粒载体和菌株
3.1.3 药品及试剂
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 原核表达质粒的构建
3.2.2 pCold ?-L-serpin蛋白小量诱导表达
3.2.3 pCold ?-L-serpin蛋白大量表达并纯化
3.2.4 免疫
3.2.5 ELISA检测抗体效价
3.2.6 多克隆抗体纯化
3.2.7 免疫印迹检测抗体特异性
3.3 结果
3.3.2 L-serpin蛋白诱导表达和纯化
3.3.3 L-serpin多克隆抗体效价检测
3.3.4 L-serpin多克隆抗体特异性检测
3.4 讨论
第4章 L-serpin的组织分布与细胞定位及不同抗原刺激下L-serpin的表达变化
4.1 材料
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验药品和试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 方法
4.2.1半定量检测各组织中L-serpin基因的相对表达量
4.2.2 QPCR检测L-serpin基因在病原体刺激后相对表达量变化
4.2.3 Western Blot检测L-serpin在病原体刺激后表达量变化
4.2.4 免疫荧光检测
4.2.5 统计
4.3 结果
4.3.1 L-serpin基因在七鳃鳗各组织的相对表达量
4.3.2 Western Blot检测L-serpin蛋白水平七鳃鳗各组织表达量
4.3.3 激光共聚焦检测L-serpin在七鳃鳗白细胞的亚细胞定位
4.3.4 L-serpin基因在菌类及PolyI:C刺激后表达量变化
4.4讨论
第5章L-serpin与L-C1q相互作用参与免疫学活性研究
5.1 材料
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验药品和试剂
5.1.3 仪器设备
5.2 方法
5.2.1 L-serpin突变体的设计和表达以及纯化
5.2.2 蛋白酶抑制活性实验
5.2.3 Co-IP检测L-serpin与L-C1qDC-1相互作用
5.2.4 Biacore检测L-serpin与L-C1qDC-1相互作用
5.2.5 高内涵检测L-serpin对七鳃鳗血清细胞杀伤效果的影响
5.2.6 CCK8检测L-serpin对七鳃鳗血清细胞杀伤效果的影响
5.2.7流式细胞术检测L-serpin影响Hela细胞表面L-C3沉积实验
5.2.8 统计
5.3 结果
5.3.1 L-serpin突变体的设计和表达以及纯化
5.3.2 L-serpin蛋白酶抑制活性检测
5.3.3 L-serpin与L-C1q相互作用
5.3.4 L-serpin抑制七鳃鳗血清细胞杀伤活性
5.3.5 L-serpin降低Hela细胞表面L-C3沉积实验
5.4 讨论
第6章L-serpin对LPS刺激下细胞炎症因子产生的影响
6.1 材料
6.1.1主要试剂
6.1.2 主要仪器
6.2 实验方法
6.2.1 真核表达载体的构建
6.2.2 LPS刺激过表达pIRES2-AcGFP1-Nuc-L-serpin的H293T细胞
6.2.3 高内涵筛选检测LPS刺激下过表达pIRES2-AcGFP1-Nuc-L-serpin的H293T细胞死亡率
6.2.4 体外以LPS和rL-serpin刺激RAW264.7和HUVEC细胞
6.2.5 体外以LPS和rL-serpin刺激七鳃鳗SB细胞和白细胞
6.2.6 免疫荧光检测LPS与L-serpin相互作用
6.2.7 Biacore检测LPS与L-serpin相互作用
6.2.8 菌结合实验
6.2.9 统计
6.3结果
6.3.1 pIRES2-AcGFP1-Nuc-L-serpin真核表达载体的构建
6.3.2 L-serpin抑制LPS引起的细胞炎症因子表达上调和细胞死亡
6.3.3 L-serpin抑制LPS引起七鳃鳗细胞炎症因子表达的上调
6.3.4 rL-serpin与LPS相互作用
6.3.5 L-serpin具有多种菌结合能力
6.4 讨论
结论
本论文的创新点
参考文献
附录A附录内容名称
攻读硕士期间论文发表情况
项目支持
致谢
辽宁师范大学;
