辣椒素类TMEM16A抑制剂的发现及分子药理学研究

目录

引言

1 文献综述

1.1钙激活氯离子通道

1.2 TMEM16A的发现

1.3 TMEM16A的表达

1.4 TMEM16A的生理病理功能

1.4.1 上皮细胞液体转运

1.4.2 平滑肌收缩

1.4.3 神经兴奋与伤害感受

1.4.4 肿瘤和细胞迁移

1.4.5 信号转导

1.5 TMEM16A与相关疾病

1.5.1 腹泻

1.5.2 便秘

1.5.3 高血压

1.5.4 癌症

1.6 TMEM16A的调节剂

1.7 研究的目的及意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验仪器

2.1.2 实验药品

2.1.3 实验细胞

2.1.4 实验动物

2.2 实验方法

2.2.1 主要试剂配方

2.2.2 细胞培养

2.2.3 TMEM16A抑制剂的荧光测定

2.2.4 短路电流测定

2.2.5 细胞内Ca2+浓度测定

2.2.6 小鼠组织切片

2.2.7 肠道平滑肌收缩

2.2.8 小鼠胃肠蠕动

2.2.9 小鼠全肠转运时间（ITT）

2.2.10 轮状病毒感染所致腹泻的新生小鼠模型

2.2.11 粪便含水量测定

2.2.12 数据统计分析

3 结果与分析

3.1 TMEM16A氯离子通道抑制剂的筛选

3.2 辣椒素类化合物的时间动力学与可逆性分析

3.3 辣椒素类化合物的细胞短路电流测定

3.3.1 顶膜侧短路电流测定

3.3.2 基底膜侧短路电流测定

3.4 辣椒素类化合物的选择性分析

3.4.1 辣椒素类化合物对CFTR氯离子通道的作用

3.4.2 辣椒素类化合物对肠上皮CaCC氯离子通道的作用

3.4.3 辣椒素类化合物对HT-29细胞内Ca2+浓度的影响

3.4.4 辣椒素类化合物对小鼠结肠浆膜侧Na+-K+-ATPase的作用

3.4.5 辣椒素类化合物对小鼠结肠浆膜侧K+通道的作用

3.5 辣椒素类化合物对小鼠肠道离子转运的影响

3.5.1 辣椒素类化合物对小鼠结肠粘膜上皮CFTR氯离子通道的作用

3.5.2 辣椒素类化合物对小鼠结肠粘膜上皮CaCCs氯离子通道的作用

3.6 辣椒素类化合物对肠动力的影响

3.6.1 小鼠肠道免疫组化分析

3.6.2 辣椒素类化合物对小鼠肠道平滑肌收缩的影响

3.6.3 辣椒素类化合物对小鼠胃肠蠕动的影响

3.7 辣椒素类化合物抗轮状病毒所致新生小鼠分泌性腹泻的研究

3.7.1 二氢辣椒素和高二氢辣椒素对轮状病毒所致新生小鼠腹泻的作用

3.7.2 二氢辣椒素和高二氢辣椒素对轮状病毒所致新生小鼠胃肠蠕动的作用

4 讨论

4.1 发现了辣椒素类化合物新活性——TMEM16A氯离子通道抑制作用，该活性可能是这类化合物影响肠道平滑肌收缩的分子药理学机制之一

4.2 辣椒素类化合物可能成为研究CFTR与CaCC之间关系的新工具

结论

参考文献

致谢