Gli2和FoxM1在肝癌中的表达及其与临床预后的关系

摘要

研究背景：　　肝癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,在全球恶性肿瘤发病率中排第五位,死亡率排第二位,每年约有69万患者死于肝癌[1]。肝癌分类中以肝细胞癌占绝大多数,导致原发性肝癌发生的原因主要包括病毒性、酒精性肝炎及肝硬化、黄曲霉素等,而在我国以慢性肝炎(主要是乙肝和丙肝)为主要病因。目前,肝癌的根治仍是以手术切除为主,并辅以其他的治疗方法,如介入治疗、化疗、放疗及分子靶向治疗。因肝癌早期临床症状不典型,就诊时多处于终末期,且肝癌细胞还具有对放化疗不敏感且术后易复发转移的特点,故造成肝癌患者总生存期较短。然而对于肝癌的复发、侵袭转移的机制目前研究还不是十分明确,且缺乏有效的预测肝癌复发、转移的分子指标。　　Hedgehog信号通路在细胞生长、胚胎形成及维持成人组织内环境稳定方面扮演重要的作用。同时更多研究表明Hedgehog信号参与多种肿瘤的形成及发展,如基底细胞癌、消化道肿瘤、卵巢癌等。Gli作为Hedgehog信号通路的关键核转录因子,有研究报道 Gli2在肝癌中存在过表达并且与肝癌术后的复发转移存在密切联系。FoxM1为Fox转录因子家族中的一种,其涉及细胞的多种生物过程,如细胞分化、迁移、侵袭、DNA损伤修复、组织内环境稳态、血管形成、炎症反应等。因此,探索Gli2及FoxM1在肝癌发生、发展及术后复发、转移的过程中所发挥的作用具有重要意义。　　研究目的：　　1.研究Hedgehog信号通路关键分子Gli2及FoxM1在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征之间关系。　　2.分析Gli2、FoxM1与肝癌患者总生存期及无瘤生存期之间的关系。　　3.探讨Gli2-FoxM1对预测肝癌复发、转移的临床价值。　　研究方法：　　一、临床样本的选取　　肝细胞癌组织及相应的癌旁组织标本来自于2008年1月至2012年1月在南昌大学第一附属医院病理科所保存的手术切除下来的蜡块组织,共92例。新鲜肝细胞癌及癌旁组织来源于科研中心标本库所保留的南昌大学第一附属医院普外科行肝癌切除术时留取的冰冻样本,共20例。临床样本要求来自满18岁的成人,同时符合既往无其他肿瘤病史,术前未行任何放化疗的原发性肝细胞癌患者。留取样本前向患者说明样本的用途,征得患者同意后再留取样本。先于病理科查询行肝癌切除术的患者,同时记录该患者的病理资料,后于病案室查询相关患者的临床病例资料,最后对上述所有病人进行随访。　　二、原发性肝细胞癌中Gli2及FoxM1的检测　　将选取的92例标本通过HE染色再次确认其病理诊断,通过免疫组织化学二步法及Western Blot方法检测Hh信号通路重要组分蛋白Gli2及FoxM1的表达;采用卡方检验、秩和检验、Spearman rank correlation分析检验等统计方法分析原发性肝细胞癌中Gli2和FoxM1的表达与临床病理参数之间的关系。　　三、随访　　先于病理科查询行肝癌切除术的患者,记录该患者的病理资料(姓名、肿瘤分级、肿瘤最大径、肝硬化、脉管侵犯),后于病案室查询患者的临床病例资料(住院号、联系方式、HBV感染、术前AFP、术后有无行TACE术),最后通过电话及查找患者入院复查相关资料等方式对上述所有病人进行随访,记录在2013年6月以前,上述患者术后治疗情况及复发、死亡时间。　　研究结果：　　一、Gli2在肝细胞癌中过表达及与临床病理特征间的关系。　　1.在92例原发性肝细胞癌组织中,Gli2高表达率为56.5％,而其相应的正常组织中Gli2高表达率为4.5%,两者差异具有明显统计学意义(P<0.001);肝细胞癌组织中Gli2的表达主要集中在细胞核及细胞质中,正常组织中Gli2的表达主要集中在细胞质中。　　2. Gli2在肝细胞癌中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、肝硬化、HBV感染、AFP及TNM分期均无明显相关。　　3. Gli2在肝细胞癌中的表达与肿瘤的病理分级、脉管侵犯及BCLC分期均存在明显相关。　　二、FoxM1在肝细胞癌中过表达及与临床病理特征间的关系。　　1.在92例原发性肝细胞癌组织中,FoxM1的高表达率为48.9%,而其相应的正常组织中FoxM1的高表达率为11.9%,两者差异具有明显统计学意义(P<0.001);肝细胞癌组织中 FoxM1的表达主要集中在细胞核及细胞质中,正常组织中FoxM1的表达主要集中在细胞质中。　　2. FoxM1在肝细胞癌中的表达与患者的性别、年龄、肝硬化、HBV感染、AFP及TNM分期均无明显相关。　　3. FoxM1在肝细胞癌中的表达与肿瘤直径、病理分级、脉管侵犯及BCLC分期存在明显相关。　　三、Gli2与FoxM1在肝细胞癌中相关性分析。　　研究结果显示,在Gli2阳性表达的肝细胞癌中FoxM1的表达也呈阳性,且两者的表达呈现出一致性。Gli2与FoxM1蛋白在肝细胞癌组织中的表达呈现正相关,两者具有统计学差异(R=0.288,P<0.05)。　　四、Gli2及FoxM1蛋白与肝细胞癌患者预后的关系。　　Gli2及FoxM1的表达与患者的总生存期和无瘤生存期相关。在肝细胞癌中Gli2及FoxM1蛋白表达低的患者总生存期及无瘤生存期均明显高于表达高者(P<0.05);　　研究结论：　　Gli2及FoxM1在肝细胞癌中存在高表达,提示Gli2及FoxM1可能参与肝细胞癌的发生发展过程,两者的表达正相关说明在肝细胞癌的发生发展过程中两者存在共同协调的作用,同时两者的表达与肝细胞癌患者的生存期存在明显相关。提示两者联合检测对于原发性肝细胞癌的检测、判断预后具有重要意义。

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第1章 引言

第2章 Gli2及FoxM1在肝细胞癌中的表达

2.1 材料及方法

2.1.1 研究对象

2.1.2 药品与试剂

2.1.3 实验仪器

2.1.4 实验方法

2.1.5 数据统计分析

2.2 实验结果

2.2.1 一般资料

2.2.2 Gli2在肝细胞癌及相应癌旁中的表达

2.2.3 FoxM1在肝细胞癌及相应癌旁中的表达

2.2.4 肝细胞癌中Gli2及FoxM1蛋白表达的相关性分析

第3章 Gli2及FoxM1与人肝细胞癌临床预后的关系

3.1 研究对象与方法

3.1.1 研究对象

3.1.2 资料收集及实验方法

3.1.3 数据统计分析

3.2 随访结果

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

综述

参考文献