伊马替尼对K562细胞粘蛋白型O-糖基化的影响

摘要

目的：伊马替尼处理K562细胞后，分析粘蛋白型肿瘤相关糖抗原（TACAs）的表达水平差异；同时检测合成粘蛋白型TACAs的几种糖基转移酶基因mRNA的表达水平变化以及ppGalNAc-Ts与内质网共定位程度的变化，并初步探讨K562细胞表面异常O-糖基化的原因。初步讨论伊马替尼耐药的K562细胞粘蛋白型TACAs及合成这些粘蛋白型TACAs的糖基转移酶基因mRNA的表达水平变化。　　方法：（1）伊马替尼处理K562细胞后，流式细胞术检测细胞表面粘蛋白型TACAs表达水平变化；免疫荧光技术检测伊马替尼处理K562细胞后，糖基转移酶ppGalNAc-Ts与内质网的共定位程度的变化。（2）伊马替尼处理K562细胞后，RT-PCR检测合成粘蛋白型TACAs的糖基转移酶基因mRNA的表达水平变化。（3）通过逐步提高培养基中伊马替尼的浓度，筛选得到伊马替尼耐药的K562细胞株，通过RT-PCR、细胞凋亡实验和MTT鉴定该耐药细胞株；流式细胞术检测K562耐药细胞株细胞表面粘蛋白型TACAs的表达水平变化，RT-PCR检测K562耐药细胞株中合成粘蛋白型TACAs的几种糖基转移酶基因mRNA的表达水平差异。　　结果:（1）伊马替尼处理K562细胞后，细胞表面的Tn抗原表达上升，而T抗原和唾液酸化的T抗原表达下降，糖基转移酶ppGalNAc-Ts与内质网的共定位程度降低。（2）伊马替尼处理K562细胞后，ppGalNAc-T2、ST3NAc1、C1Gal-T1、ST6GalNac1和ST6GalNAc4五种糖基转移酶基因的mRNA表达水平都有不同程度的下降。（3）筛选得到伊马替尼耐药的K562细胞株，其MDR1基因表达水平明显增高，细胞凋亡实验和MTT实验鉴定该细胞株确实具有耐药性，并将其命名为K562A；流式细胞术检测K562A细胞表面Tn抗原和唾液酸化的T抗原表达水平比K562细胞高，而T抗原比K562细胞低。RT-PCR检测K562A细胞株中ppGalNAc-T2、ST3Gal1和ST6GalNAc4三种糖基转移酶基因的mRNA表达水平比K562细胞高，而K562A细胞株中C1Gal-T1和ST6GalNAc1两种糖基转移酶基因的mRNA表达水平比K562细胞低。　　结论：（1）伊马替尼能影响K562细胞表面Tn抗原、T抗原和唾液酸化的T抗原等粘蛋白型TACAs的表达。（2）BCR-ABL激酶能增强Src激酶的活性，Src激酶促使ppGalNAc-Ts通过COP I有被小泡从高尔基体运送到内质网，从而使O-糖链的合成方式发生变化，进而影响K562细胞表面粘蛋白型TACAs的表达，据此推测伊马替尼通过抑制BCR-ABL激酶活性从而可能影响O-糖链的起始合成，进而影响细胞表面的粘蛋白型TACAs表达发生变化。（3）伊马替尼还能影响K56细胞中合成TACAs的糖基转移酶基因的表达，推测伊马替尼影响K562细胞表面粘蛋白型TACAs的表达还可能是通过抑制相关糖基转移酶基因的表达而引起的。（4）筛选得到的伊马替尼耐药细胞株K562A高表达P-糖蛋白，K562A细胞表面Tn抗原和唾液酸化的T抗原表达水平都高于K562细胞，而T抗原表达水平低于K562细胞。两细胞TACAs表达差异的原因可能是由于合成这些TACAs的糖基转移酶基因的表达水平不同而引起的。

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前 言

1.粘蛋白型O-糖基化

2.糖基转移酶与肿瘤

3.慢性髓细胞性白血病及其O-糖基化

参考文献

第一部分 伊马替尼对K562细胞株表面粘蛋白型肿瘤相关糖抗原表达水平的影响及对ppGalNAc-Ts在细胞器中定位的影响

1 引 言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二部分 伊马替尼对K562细胞中合成粘蛋白型肿瘤相关糖抗原的糖基转移酶基因在mRNA水平表达的影响

1 引 言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第三部分 K562耐药细胞株的建立及其粘蛋白型 O-糖基化的初步研究

1 引 言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

参考文献

全文小结

综 述

攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文

受资助的基金项目

附录 中英文缩略词表

致谢