逆向脂肪酸β--氧化途径高效合成中链脂肪酸的研究

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摘要

第一章文献综述

1．1 概述

1．1．1 中链脂肪酸代谢特征

1．1．2中链脂肪酸的应用

1．1．3植物提取法生产中链脂肪酸

1．1．4生物合成法生产中链脂肪酸

1．2国内外研究及存在的问题

1．2．1 脂肪酸合成途径存在低效性

1．2．2逆向脂肪酸β-氧化途径的作用机制

1．2．3合成途径限制性步骤不明确

1．3研究目的和意义

1．4主要研究内容

1．4．1逆向脂肪酸β-氧化途径的初步构建

1．4．2途径限制性辅因子鉴定及其与乙酰辅酶A的协同调控

1．4．3脂肪酸胞外分泌系统的构建

第二章中链脂肪酸合成途径的初步构建

2．1 前言

2．2材料和方法

2．2．1菌株与质粒

2．2．2培养基

2．2．3仪器和设备

2．2．4试剂、酶及相关试剂盒

2．2．5分子生物学操作

2．2．6菌株培养及发酵

2．2．7产物的检测方法

2．2．8 SDS-PAGE凝胶电泳

2．3结果与分析

2．3．1 逆向脂肪酸β-氧化途径的选择

2．3．2途径关键基因的获得

2．3．4 SDS-PAGE电泳验证关键酶基因表达

2．3．5 GC-MS鉴定

2．4本章小结

参考文献

第三章乙酰辅酶A合成途径的构建

3．1 前言

3．2材料和方法

3．2．1菌株与质粒

3．2．2培养基

3．2．3分子生物学操作

3．2．4菌株培养条件

3．2．5检测方法

3．3结果与分析

3．3．1 CRISPR-Cas9技术敲除改造乙酰辅酶A代谢途径

3．3．2过量表达乙酰辅酶A合成酶代谢途径相关基因

3．3．3 过量表达不同来源乙酰辅酶A合成酶

3．4本章小结

参考文献

第四章途径限制性辅因子鉴定及其与乙酰辅酶A的协同调控

4．1 前言

4．2材料和方法

4．2．1菌株和质粒

4．2．2 培养基

4．2．3分子生物学操作

4．2．4菌株培养条件

4．2．5产物的检测方法

4．3结果与分析

4．3．1辅因子代谢途径改造

4．3．2 关键前体物质乙酰辅酶A及还原性辅因子NADH协同调控

4．4本章小结

参考文献

第五章脂肪酸胞外转运系统的构建及鉴定

5．1 前言

5．2材料和方法

5．2．1菌株与质粒

5．2．2 培养基

5．2．3分子生物学操作

5．2．4菌株培养条件

5．2．5产物的检测方法

5．3 结果

5．3．1转运蛋白库的建立

5．3．2转入蛋白及转出蛋白的鉴定

5．3．3 CRISPER-Cas9技术敲除转入蛋白基因抑制脂肪酸摄入途径

5．4本章小结

参考文献

全文结论

附录

致谢

攻读学位期间取得的学术成果