声明
摘要
缩略语表
第一章文献综述
1 植物先天免疫系统
1．1病原分子相关模式(PAMPs)触发的免疫(PTI)
1．2效应子触发的免疫(ETI)
2类病斑突变体研究进展
2．1影响类病斑发生的途径
2．2水稻类病斑基因的克隆
2．3植物类病斑与抗病性的关系
3植物环核苷酸门控离子通道蛋白(CNGC)
3．1植物CNGC的基本性质
3．2植物CNGC的功能研究
3．3植物CNGC的调控机制
4水杨酸信号在水稻免疫反应中的作用
4．1 OsNPR1依赖的水杨酸信号途径
4．2 OsWRKY45依赖的水杨酸信号途径
4．3 OsNPR1和OsWRKY45对下游基因的调节
5水稻抽穗期与地域适应性及抽穗期基因调控网络
5．1水稻抽穗期与地域适应性
5．2水稻抽穗期基因调控网络
6本研究的目的和意义
第二章水稻类病斑突变体cds1的表型观察和基因图位克隆
1 材料方法
1．1植物材料和生长条件
1．2台盼蓝(trypan blue)染色
1．3 TUNEL分析叶片细胞程序性死亡
1．4叶绿素含量测定
1．5 RNA提取和qPCR分析
1．6稻瘟病抗病性分析
1．7 DNA提取
1．8分子标记检测
1．9 InDel分子标记开发
1．10基因初定位和精细定位
1．11载体构建和转化
2结果与分析
2．1突变体类病斑表型分析
2．2突变体抗病性分析
2．3遗传分析
2．4精细定位
2．5转基因互补
2．6 CRISPR敲除内源伪CNGC9
3讨论
3．2 cds1的突变基因为OsCNGC9
第三章OsCNGC9的功能分析
1材料与方法
1．1氨基酸序列比对和进化树分析
1．2启动子活性分析
1．3原位杂交
1．4亚细胞定位
1．5蛋白互作分析
1．6大肠杆菌离子积累测定
1．7膜片钳实验
1．8钙成像实验
1．9钙离子净流速测量
1．10活性氧爆发的检测
1．11 PAMPs及SA处理检测基因表达
1．12酵母单杂分析
1．13凝胶迁移实验
1．14体外染色质免疫共沉淀
1．15荧光素酶活性分析
2结果与分析
2．1进化树分析与氨基酸序列比对
2．2时空表达分析
2．3亚细胞定位
2．4 OsCNGC9与水稻CNGC家族成员的互作
2．5 OsCNGC9离子通透性鉴定
2．6 OsCNGC9调节PTI中的钙离子内流、ROS爆发和PR基因表达
2．7 OsCNGC9激活PTI中的SA信号转导级联
2．8 OsWRKY45直接促进OsCNGC9的转录
2．9 OsCNGC9的转录正向调节水稻免疫
3讨论
3．1 OsCNGC9是一个典型的环核苷酸门控离子通道
3．2 OsCNGC9参与调控水稻PTI反应
3．3上调OsCNGC9转录水平有利于提高水稻广谱抗性
3．4 OsCNGC9参与调节PTI反应还有很多未知之处
3．5 OsCNGC9调节水稻PTI的模型
第四章OsMYB1R1-VP64调控水稻抽穗期的功能分析
1材料与方法
1．1植物材料和生长条件
1．2载体构建和转基因
1．3 Western blot分析
1．4亚细胞定位
1．5激活活性分析
1．6 qPCR分析
1．7进化树分析
2结果与分析
2．2 OsMYB1R1-VP64延长水稻抽穗期
2．3 OsMYB1R1-VP64抑制Ehd1和成花素基因的表达
2．4 OsMYB1R1-VP64调控水稻抽穗期独立于Hd1、DTH8和Ghd7
2．5 OsMYB1R1表达模式分析
2．6 OsMYB1R1蛋白性质分析
3讨论
3．3 VP16给作物遗传改良提供了一种新的选择
第五章OsHAPL1调控水稻抽穗期的功能分析
1材料与方法
1．1植物材料和生长条件
1．2载体构建
1．3 qPCR分析
1．4亚细胞定位
1．5酵母双杂交分析
2．1过表达OsHAPL1延迟抽穗期
2．2敲除OsHAPL1在长日照条件下提早抽穗期
2．3 OsHAPL1是一个核定位蛋白，在叶片中表达较高
2．5 OsHAPL1和DTH8互作
2．6 OsHAPL1、DTH8和Hd1在E．coli中可以形成复合体
2．7 OsHAPL1、DTH8和Hd1可以和HAP家族成员在酵母中互作
2．8 OsHAPL1、DTH8和Hd1与转录起始复合物在酵母中互作
2．9 OsHAPL1抑制Ehd1及下游成花素基因的表达
3讨论
第六章全文总结
1 全文总结
1．1 cds1是一个抗病性减弱的类病斑突变体
1．3 OsCNGC9是一个典型的环核苷酸门控离子通道
1．4 OsCNGC9参与调节水稻的PTI反应
1．5 OsWRKY45直接结合OsCNGC9启动子促进其转录
1．6上调OsCNGC9的转录提高了水稻广谱抗病性
1．8转录激活子VP16在作物遗传改良中的潜在应用价值
2本研究的创新之处
参考文献
附录
在读期间发表的论文
致谢
南京农业大学;
