不同培养条件下角质形成细胞性能的比较及其构建的人三维皮肤替代物的优化

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英文缩写索引

第一章:绪论

1.1 三维皮肤替代物的概述

1.2 角质形成细胞的概述

1.3 本论文的研究目的、实验设计、实验方法

1.3.1 研究目的

1.3.2 实验设计

1.3.3 实验方法

第二章 三种培养条件下角质形成细胞性能的比较

2.1 实验材料与试剂

2.1.1 实验标本

2.1.2 主要仪器、主要耗材与主要试剂

2.2实验方法

2.2.1 原代角质形成细胞的分离

2.2.2 原代角质形成细胞的培养

2.2.3罗丹明B染色

2.2.4实时荧光定量PCR

2.2.5 细胞免疫荧光染色

2.2.6 统计学方法

2.3 实验结果

2.3.1角质形成细胞形态学观察结果

2.3.2 角质形成细胞克隆形成效率

2.3.3角质形成细胞干性基因、分化基因检测

2.3.4 角质形成细胞干性、分化标志物免疫荧光染色

2.3.5 角质形成细胞增殖标志物免疫荧光检测

2.4 讨论

第三章 利用组织工程学方法体外构建三维皮肤替代物

3.1 实验材料

3.1.1 仪器、耗材及试剂

3.2 实验方法

3.2.1 真皮成纤维细胞的分离

3.2.2 成纤维细胞的培养

3.2.3 三维皮肤替代物的构建

3.2.4石蜡切片的制作

3.2.5 苏木素-伊红（HE）染色

3.2.6 OCT包埋并制作冰冻切片

3.2.7 组织免疫荧光染色

3.2.8 检测三维皮肤替代物表真皮基因表达

3.2.9 检测经皮水分丢失

3.3 实验结果

3.3.1 三维皮肤替代物HE染色

3.3.2 三维皮肤替代物表皮标志物免疫荧光染色

3.3.3 三维皮肤替代物基底膜带标记物免疫荧光染色

3.3.4 三维皮肤替代物真皮标志物免疫荧光染色

3.3.5 检测三维皮肤替代物表真皮相关基因表达

3.3.6 三维皮肤替代物经皮水分丢失检测

3.4 讨论

第四章 构建预血管化的三维皮肤替代物

4.1 实验材料与试剂

4.1.1 实验标本

4.1.2 主要仪器、耗材与试剂

4.2 实验方法

4.2.1 脐静脉血管内皮细胞的分离培养

4.2.2 成纤维细胞及脐静脉血管内皮细胞共培养

4.2.3 细胞免疫荧光染色

4.2.4 构建预血管化的三维皮肤替代物

4.2.5 检测具有血管结构的三维皮肤替代物表皮干性基因表达

4.3 实验结果

4.3.1 成纤维细胞与脐静脉血管内皮细胞共培养

4.3.2 二维成纤维细胞与脐静脉血管内皮细胞共培养免疫荧光染色

4.3.3 预血管化的三维真皮替代物形态学观察

4.3.4 检测预血管化的三维皮肤替代物表皮干性基因表达

4.4 讨论

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间成果