鱼腥草再生体系建立及不同居群综合性状比较研究

摘要

鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜(Houuuynia cordate Thunb.)的全草，药食兼用，具有抗炎抑菌、抗病毒、增强机体免疫等作用，是鱼腥草注射液的主要原料。目前，已被国家卫生部正式确定为“既是药品，又是食品”的极具开发潜力的药用植物之一。 本实验一方面通过植物组织培养技术建立了鱼腥草再生体系，另一方面以挥发油、甲基正壬酮、总黄酮、绿原酸、槲皮素、游离氨基酸、矿质元素、维生素、粗脂肪、可溶性总糖等为综合评价指标，对不同居群鱼腥草的化学成分含量进行了比较研究，为鱼腥草遗传资源的保护、优良品种选育和利用提供理论依据。 1.鱼腥草再生体系的建立本研究通过不定芽发生途径和体细胞胚胎发生途径，筛选出了鱼腥草再生植株培养的最适培养基和最佳外植体，建立了一套高效快速的鱼腥草离体再生体系。 鱼腥草不定芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L；最适外植体为芽。不定芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L；最佳生根培养基是MS+IBA 1.0 mg/L。最适蔗糖浓度为30 g/L，最适PH为5.8。 多因子正交试验结果表明：鱼腥草叶片胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为改良MS+2,4-D 1.. mg/L+6-BA 0.5 mg/L；疏松愈伤组织诱导的培养基为改良MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L；在改良的MS+6-BA 1.0 mg/L固体培养基上既可以使胚性愈伤组织进一步诱导产生体细胞胚，又可直接诱导叶片、叶柄产生体细胞胚。体细胞胚在无激素的培养基即可发育成苗，形成完整植株。再生植株在V<,蛙石>+V<,珍珠岩>+V<,营养土>=1:1:1的基质中成活情况最好，成活率可达96％。 2.细胞学观察结果表明，不同居群的鱼腥草染色体数目和形态特征有差异。所测居群鱼腥草染色体数目有20、22、24、26、30和32，其中染色体数目20、26、30、32属首次发现。 3.解剖学观察结果表明，不同居群的鱼腥草在根、地上茎、地下茎、叶等器官在解剖结构上存在较大差异。据实验结果推测，鱼腥草解剖结构中地上茎、地下茎和叶等器官中油细胞数目、维管束数目以及栅栏组织排列的疏松程度与鱼腥草的挥发油含量有一定关系。油细胞数目和维管束数目多，栅栏组织排列疏松，其挥发油含量较高。 4.药用成分比较分析结果表明，不同居群鱼腥草中挥发油、甲基正壬酮、总黄酮、绿原酸、槲皮素含量存在明显差异。 水蒸汽蒸馏法测定挥发油含量结果表明：巢湖居群挥发油含量最高可达0.229％，黄山居群和合肥居群次之，分别为0.162％和0.142％，湖北居群含量最低，仅为0.082％。 气相色谱法测定甲基正壬酮含量结果表明：霍山居群含量最高为0.102 mg/g，巢湖和广德居群次之，分别为0.094 mg/g和0.093mg/g，铜陵居群含量最低为0.015 mg/g。紫外分光光度计法测定总黄酮含量结果表明：黄山居群含量最高为13.26mg/g，组培苗次之，为11.84 mg/g，铜陵、安庆和石台居群含量也较高，分别为10.62 mg/g、10.61 mg/g、10.04 mg/g，四川泸州居群含量最低为4.37 mg/g。 HPCE法测定绿原酸和槲皮素含量的结果表明：巢湖居群中绿原酸含量最高为3.44mg/g，铜陵次之为3.05 mg/g，四川内江居群鱼腥草中含量最低，为0.31 mg/g；组培苗中槲皮素含量最高为7.26 mg/g，巢湖次之，为5.14 mg/g，石台居群中含量最少，为1.17 mg/g。 综合以上指标评价，巢湖鱼腥草虽然并非所有评比项目都名列前茅，但多数有效成分的含量均较高，品质较好，具有较高的药用价值和推广应用价值。 5.营养成分比较分析结果表明，不同居群鱼腥草在各种营养成分上也存在差异。各居群都含有游离氨基酸、矿质元素、维生素、粗脂肪、可溶性总糖等丰富的营养成分。 游离氨基酸测定结果表明：各居群在游离氨基酸组成和含量上存在较大差异。其中，绩溪居群氨基酸总含量最高为2186.13 mg/kg，石台居群次之，为1108.23 mg/kg，霍山居群最低，为400.71 mg/kg。 矿质元素测定结果表明：各居群鱼腥草矿质元素中K、Ca含量较高，安庆居群的K含量最高，为6243 mg/kg，合肥居群Ca含量最高，为1237 mg/kg，黄山居群Fe含量最高，为1289 mg/kg，组培苗中Fe含量最低，仅为12 mg/kg；霍山居群zn含量最高，为8.0 mg/kg，在所有居群中未检出重金属元素Pb和Cd。 维生素测定结果表明：组培苗Vc含量最高为36.4μg/g，广德居群次之，为27.96μg/g，黄山居群中不含Vc，绩溪居群维生素总含量最高，为396.59μg/g，安庆居群最低为41.33μg/g。 可溶性总糖测定结果表明：广德居群可溶性总糖含量最高为3.91％，铜陵居群次之，为3.82％，自贡居群含量最低，为1.07％。 粗脂肪测定结果表明：四川都江堰居群粗脂肪含量最高，为7.82％，滁州居群次之，为7.22％，巢湖居群含量最少为2.35％。 综合以上指标评价，绩溪居群鱼腥草营养成分较丰富，具有较高的营养价值和推广应用价值。

目录

文摘

英文文摘

文献综述

引言

材料与方法

1材料

2仪器和试药

2.1主要仪器

2.2主要试剂和药品

3试验方法

3.1鱼腥草再生体系的建立

3.2不同居群鱼腥草的细胞学研究

3.3不同居群鱼腥草比较解剖学研究

3.4不同居群鱼腥草化学成分研究

4统计分析

结果与分析

1鱼腥草再生体系的建立

1.1不定芽发生途径

1.2体细胞胚发生途径

2不同居群鱼腥草的细胞学比较研究

2.1组培苗鱼腥草染色体观察及核型分析

2.2安徽合肥居群鱼腥草染色体观察及核型分析

2.3安徽巢湖居群鱼腥草染色体观察及核型分析

2.4安徽芜湖鱼腥草染色体观察及核型分析

2.5安徽广德鱼腥草染色体观察及核型分析

2.6安徽铜陵鱼腥草染色体观察及核型分析

2.7安徽滁州鱼腥草染色体观察及核型分析

2.8安徽黄山鱼腥草染色体观察及核型分析

2.9安徽绩溪鱼腥草染色体观察及核型分析

2.10安徽石台鱼腥草染色体观察及核型分析

2.11安徽霍山鱼腥草染色体观察及核型分析

2.12安徽安庆鱼腥草染色体观察及核型分析

2.13四川都江堰鱼腥草染色体观察及核型分析

2.14四川泸州鱼腥草染色体观察及核型分析

2.15四川自贡鱼腥草染色体观察及核型分析

2.16四川内江鱼腥草染色体观察及核型分析

3不同居群鱼腥草的解剖结构比较研究

3.1根的解剖结构

3.2茎的解剖结构

3.3叶的解剖结构

4不同居群鱼腥草化学成分含量比较

4.1不同居群鱼腥草药用成分比较研究

4.2不同居群鱼腥草中营养成分比较研究

讨 论

结 论

参考文献

致 谢

附 录

作者简历