丛枝菌根真菌共培养体系的建立及多胺对其生长效应的研究

摘要

地球上80％以上植物的根系都与一类土壤真菌--丛枝菌根真菌（Arbuscular mycorrhizas fungi，AMF）形成互惠共生体。AMF具有促进植物营养吸收、提高植物抗逆性等一系列重要的生理生态功能，可作为生物防护剂、促进剂、生物肥料、生物农药等，在生态农业中具有广阔的应用前景。该类真菌为专性活体营养微生物。本研究通过发根农杆菌介导的遗传转化诱导获得胡萝卜毛状根，以此为寄主，建立AMF幼套球囊霉菌（Glomus etunicatum，G.e）的双重培养系统，并利用该系统研究多胺（Polyamine，PA）对G.e孢子离体培养条件下的生长效应，以及对共培养体系中的G.e和毛状根的影响。获得的具体结果如下：
　　 1．成功诱导出可在无激素条件下快速生长的毛状根，PCR初步鉴定其为转化根。该毛状根在MSR培养基上生长迅速，1个月即可长满整个平板，并经多次继代后仍保持其特性，具备毛状根典型特征。筛选获得较优胡萝卜发根条件为：
　　 使用A4发根农杆菌菌株，共培养培养基为添加50mg/L Vitamin C（Vc）的水琼脂，加菌量20μl，侵染液OD600值0.6，共培养天数2d。
　　 2．建立了G.e和胡萝卜毛状根的共生培养系统：无菌的G.e孢子能够以新鲜的胡萝卜毛状根根段为宿主，经过共同培养，在培养基中形成复杂的菌丝际，并最终产生大量G.e子代孢子，顺利完成其生活史。利用该体系中约0.5cm3含有AMF新生孢子、菌丝以及侵染根段的培养基作为种子，可简便实现继代培养。
　　 3．在离体培养条件下研究了3种多胺（Polyamine，PA）包括腐胺（Putrescine,PUT）、亚精胺（Spermidine，SPD）、精胺（Spermine，SPM）对G.e孢子萌发率、菌丝长度及分枝的影响，结果表明SPD和SPM均可提高孢子萌发率，3种PA对G.e菌丝伸长和分枝都有促进作用，并可延长菌丝分枝时间；其中，SPM效果最显著，160mg/LSPM处理的菌丝分枝数高达对照的3.75倍；菌丝长度和分枝数随PA浓度升高而增加。
　　 4．研究了SPM对共培养体系中G.e孢子和毛状根的生长效应。结果显示SPM处理导致共培养早期的G.e侵染率、侵染强度和胡萝卜生物量较对照大，且第30d的孢子产量就达到对照第35d的水平。表明SPM可促进G.e对宿主早期的侵染，并加快体系中孢子的成熟，缩短了共培养周期。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 文献综述

2 引言

3 材料和方法

4 结果和分析

5 讨论

6 结论

参考文献

致谢

附录

作者简介