拟南芥青枯病抗性基因RRS1的烟草同源性的研究

摘要

本研究旨在筛选烟草种质抗青枯病基因RRS1。2008年、2009年和2011年开展了选取来自国内外81个烟草品种为材料的大田青枯病病害指数调查及RRS1基因9对SSR特异引物的筛选工作；通过9对引物及81个烟草种质的筛选，目前已鉴定出引物6F-6R(5'ATGAGAAAGAGGCTCGTCAA3'and5'ACCACAACCCTCAAGCAGTT3')能够有效地筛选种质，共筛选出3个烟草种质(G28，K346，LMAFC34)含有RRS1特异性扩增序列；预期针对引物(6R-6F)扩增的3个烟草种质材料的特异性序列进行测序并和RRS1基因的序列进行同源性比对，并对烟草种质资源进行同源性评价。研究的主要结果如下：
　　 1、烟草种质中至今没有报道过可直接利用的抗青枯病基因，拟南芥中克隆的RRS1基因是被发现的第一个青枯病抗性基因，目前只限在拟南芥中研究没有在其它作物中筛选同类基因，本研究旨在进行烟草种质抗青枯病基因RRS1的筛选研究，期望在烟草种质中寻找出具有类似抗性基因的品种，最终实现品种改良提高品种抗性。
　　 2、分别于2008年、2009年在安徽省皖南烟区烟草青枯病病圃，选择国内外文献中标注为抗青枯病的部分烟草种质及安徽省尚未鉴定抗性的地方种质共138份，田间采用高密度栽培方式、随机区组设计，鉴定其青枯病抗性。本试验中没有免疫烟草种Coker298、K346、NC86、Coker86、K399、LMAFC34、歙圆四号为高抗品种；G28等13份种质为中抗品种；其它种质在中感以上。依据大田病情指数变化对烟草种质抗性分为四类：感病型、慢病型、抗病型及免疫型，并对其进行数据规范。
　　 3、本研究采用特异引物中在扩增80个烟草种质后差异筛选出3份烟草种质(G28、K346、LMAFC34)，PCR扩增具有与阳性对照拟南芥同等分子量大小的特异带型，能够有效地筛选抗青枯病种质。利用PCR特异扩增鉴别种质不受大田环境和时间的限制，可以多重复验证结果的可靠性。
　　 4.依据混合群体分组分析法(BSA)建立抗青枯病基因池和感青枯病基因池，通过RAPD试验，从近286个随机引物中筛选出两个在两池间具有多态性的引物：PT20275和PT30229。采用PT20275引物能特异性的扩增出380bp大小的特异带或采用PT30229引物能特异性的扩增出200bp大小的特异带，即可判定其为抗性。