病毒载体诱导转录后基因沉默系统的建立及烟草（Nicotiana benthamiana）rbcS基因功能的研究

摘要

RNA沉默是一种序列特异性的RNA降解过程,主要作用于同源性较高的转录产物,它广泛存在于各种生物中,在植物中称转录后基因沉默(Post-Transcriptional Gene Silencing,PTGS)、动物中称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)、真菌中被称为RNA压制(RNA quelling).病毒诱导转录后基因沉默是由携带基因片段的病毒载体感染植物引起相应的寄主基因沉默的现象,是一种典型的RNA沉默现象.该论文建立了病毒载体诱导转录后基因沉默系统,并运用该体系研究烟草(Nicotiana benthamiana)的1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基(Ribulose-1,5-bisphosphate(RuBP)carboxylase/oxylasesmall subunit,rbcS)基因的部分功能.

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文献综述

一、前言

二、转录后基因沉默的研究进展

三、病毒诱导基因沉默系统在研究植物基因功能方面的潜在作用

四、农杆菌介导的瞬时表达体系在研究植物基因沉默中的作用

五、1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基的研究进展

六、本研究的背景、目的和意义

材料与方法

一、实验材料

二.实验方法

1.农杆菌介导的瞬时表达体系的建立

2.用病毒载体诱导转录后基因沉默系统研究核铜糖1,5二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基基因功能

结果

一.农杆菌介导的病毒载体诱导转录后基因沉默系统的建立

1.农杆菌重组子的鉴定

2.基因沉默植株的表型分析

3.农杆菌介导的转录后基因沉默瞬时表达体系的优化

二.利用病毒载体诱导转录后基因沉默系统研究烟草 (Nicotiana benthamiana)rbcS基因功能

1.RbcS基因沉默的转录水平分析

2.烟草rbcS基因沉默后的免疫印迹检测(Western blot analysis)

3.运用HPLC方法定量分析rbcS基因沉默后的光合色素变化

4.rbcS基因沉默植株和非基因沉默植株叶片光合速率对有效光辐射增强和CO2浓度升高的响应

5.CO2浓度倍增条件下的光呼吸速率，CO2补偿点和羧化效率( Pn/ Ci)

6、方差分析模型中的两因素方差分析和F检验

讨论

一、转基因植物的基因沉默(转GFP基因)和非转基因植物的内源基因沉默在启动、传导和维持阶段存在差异

二、植株的苗龄与农杆菌的浓度是诱导基因沉默瞬时表达体系的二个关键的影响因素

三、农杆菌介导的病毒诱导转录后基因沉默系统中的二个病毒载体---马铃薯X病毒载体和烟草脆裂病毒载体

四、用病毒诱导转录后基因沉默系统研究烟草1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因功能的策略

五、烟草1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的部分功能

六、方差分析模型中的两因素方差分析和F检验分析病毒载体作为研究1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因功能的媒介的可行性

结论

参考文献

附图

致谢

攻读博士学位期间的主要科研经历

已发表和待发表论文